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AMV Reverse Transcriptase反轉錄酶Promega原裝
貨號: M5101
規格:300u
保存: -20℃保存,避免反復凍融,保質期為2年。
產品內容:
產品組成 | RT1060-200 | RT1060-500 | RT1060-1000 |
逆轉錄酶(AMV) | 20μl | 50μl | 100μl |
0× AMV Reaction Buffer | 50μl | 150μl | 300μl |
DTT | 30μl | 80 μl | 150μl |
產品簡介:
逆轉錄酶(AMV)從Avian Myeloblastosis Virus分離出來,經過高度純化,不含核酸酶。可用于合成*鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉錄、測序和RNA的逆轉錄反應。
逆轉錄酶(AMV)一個活性單位U定義為:在37℃,10min條件下,使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質所需的酶量。
使用說明:
合成*鏈cDNA的步驟
以下試劑客戶自己提供
dNTPs (10mM)
引物(Oligo dT(18)或隨機引物或特異性引物
無核酸酶雙蒸水
RNA模板
RNase抑制劑
RT反應(20μl體系):
1.使用前每個組份輕輕混勻,然后2000rpm離心20s;
2.取滅過菌且無核酸酶的0.2ml PCR管,依次加入
2~5μg RNA Xμl
引物* 1μl
【引物*:Oligo dT18 (10μM)或隨機引物(50ng/μl) 或特異性引物(2μM)】
dNTPs (10mM) 1μl
補加無核酸酶的雙蒸水總體積 15.5μl
3.65℃保溫5min,然后冰浴5min;
4.往步驟3的PCR管中依次加入下列組份
RNase抑制劑(40u/μl) 0.5μl
10× AMV Reaction Buffer 2μl
DTT ( 200mM) 1μl
逆轉錄酶(AMV) 1μl
5.輕輕混勻后,然后2000rpm離心20s;
6.先在42℃保溫1 hr,然后70℃保溫15min;
7.上述產物可立即進行下一步的PCR反應或-20℃保存。
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