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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2
CUT&Tag試劑盒（pA/G-Tn5版）
樣本即用型試劑盒：含CUT&Tag實驗中除樣本和一抗和蛋白酶抑制劑以外的所有試劑，無需額外其他組分
產品應用
蛋白質-DNA互作研究：組蛋白修飾調控、轉錄因子調控等表觀作用機制研究
產品優勢
●含兩種純化磁珠：針對小片段純化，回收效果更好。
●實驗操作簡單、實驗周期短：建庫一步法，節省建庫時間；ConA使用，無需離心轉管；無需超聲片段化；樣本投入量低。
●實驗重復性好
產品描述
Hieff NGS® In-Situ DNA Binding Profiling Library Prep Kit for Illumina® V2 是針對Illumina®高通量測序平臺研發的用于CUT&Tag實驗的文庫構建試劑盒，適用于100-100,000個細胞起始量的樣本建庫。CUT&Tag是研究蛋白與DNA互作的技術，相較于傳統的ChIP-seq、CUT&RUN，該技術具有文庫構建時長更短（僅需7小時）、操作更簡單、對起始樣本要求更低、抗體投入量更少、文庫產量更高等優點。經過細胞捕獲、一抗孵育、二抗孵育、轉座酶孵育、轉座酶激活、摻入DNA標準品、細胞裂解、磁珠回收gDNA、文庫擴增和磁珠分選等步驟，靶蛋白結合的DNA片段最終轉化為適用于Illumina®平臺測序的文庫。
本試劑盒包含兩個獨立模塊：BOX-I和BOX-II。BOX-I包含結合細胞的ConA Beads、提取DNA 的DNA Extract Beads以及文庫純化的DNA Selection Beads，BOX-II包含細胞透化劑、抗體結合buffer、轉座酶結合buffer、蛋白酶K以及后續文庫擴增所需的所有試劑。此外，本試劑盒已在不同種類細胞（如293T、K562、CHO、ESC細胞等）中進行了驗證，均具有良好的建庫效率和建庫產量。本試劑盒提供的所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，程度上保證了文庫的穩定性和重復性。
實驗數據
圖 Qsep對不同細胞投入量文庫質量分析：不同樣本投入，CUT&Tag實驗都能得到一致的結果
圖：spike in 讓數據分析結果更真實：Spike in校正后，不同投入量的樣本，基因富集倍率更真實、更準確。
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 12597ES04 | 12597ES12 | 12597ES48 | ||
BOX-I | 12597-A | ? | ConA Beads | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
12597-B | ? | DNA Extract Beads | 280 μL | 840 μL | 3.36 mL | |
12597-C | ? | DNA Selection Beads | 400 μL | 1.2 mL | 4.8 mL | |
BOX-II | 12597-D | ? | 10 × Binding Buffer | 120 μL | 360 μL | 1.44 mL |
12597-E | ? | 10 × Wash Buffer | 600 μL | 1.8 mL | 7.2 mL | |
12597-F | ? | 5% Digitonin | 45 μL | 135 μL | 540 μL | |
12597-G | ? | 50 × PB Buffer | 6 μL | 18 μL | 72 μL | |
12597-H | ? | 10 × Dig-300 Buffer | 400 μL | 1.2 mL | 4.8 mL | |
12597-I | ? | pA/G-Transposome Mix | 8 μL | 24 μL | 96 μL | |
12597-J | ? | 33× Activating Buffer | 6 μL | 18 μL | 72 μL | |
12597-K | ? | 15 × Terminate Solution | 20 μL | 60 μL | 240 μL | |
12597-L | ? | 30 × Proteinase K | 10 μL | 30 μL | 120 μL | |
12597-M | ? | DNA Spike-in Mix (5 ng/μL) | 4 μL | 12 μL | 48 μL | |
12597-N | ? | 2×HiFi Amplification Mix | 100 μL | 300 μL | 1.2 mL | |
12597-O | ? | Goat Anti-Rabbit lgG(H+L)* | 2 μL | 6 μL | 24 μL | |
12597-P |
| N5 (N501)** | 4 μL | / | / | |
12597-Q | ? | N7 (N701)** | 4 μL | / | / | |
注意：*本試劑盒中包含的二抗為山羊抗兔二抗，適用于使用一抗來源于兔源的研究，若需要一抗來源于鼠源的研究，需客戶自行準備抗鼠二抗（Yeasen cat#34851ES）或其他等效產品。
**測序時 Index 序列 填寫時，測序平臺為NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500，則N501-CTCTCTAT，N701-TAAGGCGA。測序平臺為NovaSeq 6000 v1.5 reagents，MiniSeq, NextSeq,HiSeq 3000/4000，則N501-ATAGAGAG，N701-TAAGGCGA。
***本試劑盒在實驗前需自備蛋白酶抑制劑Cocktail（Yeasen Cat#20123ES）或其他等效產品。
存儲條件
BOX-I：2-8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。
