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產品信息

產品描述

文庫構建專用接頭試劑盒是Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®是Illumina高通量測序平臺文庫構建專用接頭試劑盒，包含二代測序建庫中使用的PE adapter以及12/96/192/384種UDI Primer。該試劑盒提供的UDI Primer為I5、I7 Primer預混液，配合DNA Library Prep Kit for Illumina^®使用，可構建多達384種雙端Index標記的文庫。試劑盒中提供的所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，上保證了文庫構建的穩定性和重復性。

產品組分

運輸與保存方法

冰袋運輸。所有組分-20°C保存，有效期1年。

注意事項

1）本試劑盒中DNA Adapter的濃度為15 μM，單個文庫構建的接頭使用量根據所用試劑盒進行調整。

2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過PCR擴增獲得完整的文庫。UDI Primer提供Barcode序列標簽，用于高通量測序時區分樣品。

3）本試劑盒有四種規格，分別提供12/96/192/384種UDI Primer，可以構建多達384種雙端Index標記文庫。

4）切勿加熱接頭，應在室溫讓其緩慢溶解，實驗室溫度最好設置為20-25°C。接頭避免反復凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4°C。

5）使用Hieff NGS^® Stubby UDI Primer Kit for Illumina^®試劑盒構建的DNA文庫結構如下：

6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

7）本產品僅作科研用途！

使用方法

本試劑盒使用方法按照 Hieff NGS ^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^® 試劑盒操作說明進行。

接頭連接 (Adapter Ligation)

在末端修復產物兩端連接特定的Illumina^®接頭，即Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®操作步驟3.2。

1. 根據Input DNA量按照下表1選擇合適的Adapter用量；

表1 不同Input DNA推薦的Adapter使用濃度

【注】：Input DNA 摩爾數 (pmol)≈Input DNA質量(ng)/[0.66×Input DNA平均長度 (bp)]

2. 將表2中的各種試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；

3. 配制表2所示反應體系；

表2 Adapter Ligation反應體系

【注】：*Ligation Enhancer比較粘稠，請上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時后離心使用。

**本公司接頭濃度 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)與常規商業化試劑盒一致，皆為15 μmol/L。

4. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液收集至管底；

5. 將PCR管置于PCR儀中，設置表3所示反應程序，進行接頭連接反應：

表3 Adapter Ligation反應程序

【注】：當Input DNA量較低，實驗效果不理想時，可嘗試將連接時間延長一倍。

連接產物磁珠純化 (Post Ligation Clean Up)

該步驟使用磁珠對連接產物進行純化或分選。純化可除去未連接的Adapter或Adapter Dimer等無效產物，分選可篩選特定長度DNA片段以符合測序需要，詳細操作步驟參照Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®建庫試劑盒說明書。

文庫擴增 (Library Amplification)

該步驟將對純化或長度分選后的接頭連接產物進行PCR擴增富集，使用本試劑盒接頭時，該步驟為必做步驟；

1. 將表4中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；

2. 于無菌PCR管中配制表4所示反應體系；

表4  PCR擴增反應體系

【注】：文庫擴增引物來自Yeasen接頭引物試劑盒 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)。

3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液收集至管底；

4. 將PCR管置于PCR儀中，設置表5所示反應程序，進行PCR擴增：

表5  PCR擴增反應程序

HB210809