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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1kit |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 36701ES59 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit全能核酸酶檢測試劑盒 | 36701ES59 | 1 Kit（96 Tests） |
產品描述
UCF.ME® UltraNuclease（全能核酸酶），又稱非限制性核酸內切酶、廣譜核酸酶；是一種來源于Serratia Marcescen的非特異性核酸內切酶，可在鏈內任意核苷酸間進行切割，將核酸*消化成2-5個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸，能夠在非常廣泛的條件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）降解各種形式的（雙鏈，單鏈，線狀，環狀，天然或變性）DNA和RNA，廣泛用于去除生物制品中的核酸。后續也可以通過相應的方法去除UCF.ME® UltraNuclease。
本試劑盒應用雙抗體夾心酶聯免疫檢測（夾心ELISA）原理檢測變性與非變性的UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶的殘留，用抗UCF.ME® UltraNuclease的兔多克隆抗體包被微孔板，形成固相抗體，向固相抗體微孔板中加入UCF.ME® UltraNuclease標準品和待測樣品，然后加入生物素（Biotin）標記的Anti-UltraNuclease多抗，最后加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素（SA‐HRP），形成抗體+ 抗原+抗體‐Biotin+ SA‐HRP復合物，經過洗滌后加入TMB底物顯色；TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色并在酸的作用下最終轉換成黃色，顏色的深淺與樣品中UCF.ME® UltraNuclease的量呈正相關。本試劑盒檢測定量范圍0.047-3 ng/mL；檢測下限：23.5 pg/mL。
運輸與保存方法
冰袋（wet ice）運輸。4℃保存，未開包裝的產品，一年有效。試劑打開后，有效期半年。千萬不可凍存。
配置好的試劑保存時間：1）稀釋后的洗滌緩沖液和稀釋緩沖液，4℃保存，有效期1周；2）標準品36701-C為液體，保存于4℃，有效期1年；3）配制好的檢測抗體、終止緩沖液，4℃保存，有效期1個月。
注意事項
1）試劑盒需在保質期內使用完畢。
2）禁止不同批次的相關試劑進行混用。
3）本產品僅能夠應用于檢測說明書中標注的靶點抗原與樣本。其它應用需經使用者設計驗證后，根據結果評估使用的可靠性與準確性。
4）本產品僅用于研究，不能用于臨床診斷或治療。
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產品組分
使用說明
一、試劑準備
使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫。
1×Wash Buffer配制：濃縮液平衡至室溫，充分溶解，不要有結晶。混勻，取50 mL 20×Wash Buffer至超純水中，然后定容到1 L；具體配制體積，可按照每次使用量進行配制。
2. Detection Antibody配制：使用10000 r離心20s，然后用Dilution Buffer 2將檢測抗體稀釋至工作液濃度0.5 μg/mL。
3. HRP-conjugated Streptavidin配制：使用10000 r離心20s，然后用Dilution Buffer 2以1：5000稀釋至工作濃度使用。
4. 標準品曲線的配制：準備8個無菌的1.5 mL離心管，按照標準品濃度依次進行標記。移取994 μL Dilution Buffer 1至標記為3 ng/ml的離心管中，其余各管移取500 μL，根據標準品儲存液濃度計算3 ng/ml標準品應移取的儲液體積，加至離心管中混勻，取500 μL至下一個標記濃度的離心管中，混勻，進行一系列2倍梯度稀釋標品，起始最高濃度標記3 ng/mL，低濃度為0.047 ng/mL，可按照下面的配制方法來進行。每次試驗均需制備相應的標準曲線，不同試劑盒以及不同時間的標準曲線不能混用。樣本測試時，每個孔所需標品量為100 μL，注意配制體積要高于所需體積，避免體積使用量不足。
表1 UCF.ME® UltraNuclease標準品體系配制（酶標儀檢測0.047-3 ng/mL）*
Vial | Dilution Buffer 1（μL） | 500 ng/mL UCF.ME® UltraNuclease標準品體積（μL） | 標準品終濃度（ng/mL） |
A | 994 | 6 | 3 |
B | 500 | 500 A | 1.5 |
C | 500 | 500 B | 0.75 |
D | 500 | 500 C | 0.375 |
E | 500 | 500 D | 0.188 |
F | 500 | 500 E | 0.094 |
G | 500 | 500 F | 0.047 |
H | 300 | 0 | 0=Blank |
二、實驗方法
使用前所有試劑組分以及待測樣本需要恢復室溫。強烈建議所有的標準品和待檢樣本進行雙復孔測定。
1.試劑準備：備好各種待測試劑、稀釋好的標準品和待測樣本。
2.標條確定：計算待測樣本和標準品所需酶標條，將酶標條從鋁箔袋取出，剩余的酶標條放回鋁箔袋中并封好袋口，低溫保存。
3.清洗酶標板：用1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板三次，拍干酶標板。洗板對試驗結果有重要影響，確保最后一次拍板沒有洗液殘留。
4.孵育樣本：加入標準品和待測樣本，100 μL/孔，確保15 min內完成點樣，37℃孵育1 h。
5.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標板。
6. Biotin-conjugated檢測抗體孵育：將預先配制至工作濃度的檢測抗體加入酶標板中，100 μL/孔，37℃孵育1 h。
7.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標板。
8. HRP-conjugated Streptavidin孵育：將預先配制至工作濃度的偶聯HRP親和素加入酶標板中，100 μL/孔，37℃孵育40 min。
9.清洗酶標板：棄去孔中液體，加入1×Wash Buffer（300 μL/孔）洗板五次，拍干酶標板。
10.顯色：使用10 min將底物液恢復至室溫，將底物液TMB加入酶標板中，100 μL/孔，37℃避光孵育15 min。
11.終止：加入50 μL/孔終止液至酶標板中，輕輕震動酶標板至顯色均勻。
12.讀值：20 min內讀取450 nm的光吸收值。
二、結果分析
1. 如果待測樣本OD值超出標準曲線最高點OD值，需將樣本進行稀釋后重新測定。
2. 曲線制定：根據UCF.ME® UltraNuclease全能核酸酶標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數，也可以不用減去空白孔的OD值）采用二次曲線回歸擬合，繪制標準曲線（X-標準品濃度ng/mL；Y-最終的OD450 nm），推薦使用ELISACalc.exe回歸/擬合計算軟件。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品中全能核酸酶濃度。
附件1：標準品配置流程簡圖
附件2：示例數據
以下標準曲線圖僅供參考，應以同次實驗標準品所繪標準曲線計算標本含量
附件3：實驗步驟流程簡圖
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HB210907
