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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 2000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10612ES84 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
UCF.METMmRNA Cap 2′-O-Methyltransferase GMP-grade UCF.METMmRNA Cap 2氧甲基轉移酶GMP級 | 10612ES84 | 2000 U | 985 |
10612ES92 | 10000 U | 4285 | |
10612ES97 | 50000 U | 18585 |
產品描述
mRNA Cap 2氧甲基轉移酶（UCF.METM mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）是一種來自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5′末端緊挨帽結構的第一個核苷酸的2′-O位置處添加一個甲基基團。該酶利用SAM作為甲基供體來甲基化加帽RNA，從而形成Cap1結構。Cap1結構能增強mRNA的翻譯效率，因此可有助于改善mRNA轉染和顯微注射實驗中的表達。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結構的RNA作為底物。
本品是按照GMP工藝要求生產，產品以無菌液體形式提供，可應用于體內/體外翻譯前mRNA的Cap1加帽反應。
產品性質
英文名（English Name） | UCF.METM mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase |
來源（Source） | 重組E.coli |
宿主核酸殘留（Host nucleic acid residue） | <10fg/U |
宿主蛋白殘留（Host protein residue） | <50ppm |
病原體（HBV/ HCV/HIV）檢測 | 無檢出 |
內毒素殘留（Endotoxin residue） | <0.05EU/1000U |
支原體檢測（Mycoplasma detection） | 無檢出 |
無菌檢測（Sterility testing） | 無檢出 |
純度（Purity） | ≥95%（SDS-PAGE） |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH8.0，0.1mM EDTA，1mM DTT，100mM NaCl，50%（v/v）甘油，0.1%（v/v）Trion X-100 |
活性單位定義（Unit Definition） | 一單位（U）定義為：在37℃條件下1h內甲基化10pmol的80nt帶帽RNA轉錄物所需的酶量。 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。推薦分裝凍存，避免反復凍融。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | ||
10612ES84 | 10612ES92 | 10612ES97 | ||
10612 | mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 40 μl | 200 μl | 1 ml |
使用方法
1、使用RNase-free 水將適量 Capped RNA 稀釋至16μl；
2、將稀釋的RNA 在65℃條件下加熱處理5min，反應后冰上放置 5min；
3、按下表（1）配置反應體系（適用于10μg以內Capped RNA的甲基化反應）；
4、37℃條件下孵育1h（對與目的片段長度小于200nt RNA，可將孵育時間增加到2h）；
5、10×Capping Buffer的配置如下：500mM Tris-HCl、pH8.0、50mM KCl、10mM MgCl2、10mM DTT。
表1：20μL反應體系配置
體系組分 | 20μl（Total） |
Denatured Capped RNA | 16μl |
10x Capping Reaction Buffer | 2μl |
SAM (4 mM) | 1μl |
mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase (50 U/μl) | 1μl |
注意事項
1、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2、用于實驗反應的RNA在用之前應進行純化處理并溶于RNase-free water且溶液中不能含任何的EDTA和鹽離子；
3、反應之前推薦65℃加熱5min以去除RNA的二級結構。如果轉錄產物的5′端結構復雜，可將時間延長至10min；
4、SAM試劑在pH 7–8，37°C條件下穩定性較差，需要現用現配。可預先計算好所需SAM的用量，在反應前將32 mM的儲備液稀釋成4 mM的工作液。為防止SAM降解，工作液應保存于冰上。
