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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 2000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10614ES84 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） | *（元） |
UCF.ME®mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade UCF.ME™ mRNA加冒酶(GMP級) | 10614ES84 | 2000U | 4625 | 4394 |
10614ES92 | 10000U | 17825 | 16934 | |
10614ES94 | 20000U | 29825 | / | |
10614ES96 | 100000U | 119325 | / |
產品描述
真核生物中mRNA經轉錄后修飾在5'端形成一個特殊結構，即帽子結構，該結構對mRNA的穩定、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷酰基轉移酶活性和鳥嘌呤甲基轉移酶活性，可將7-甲基鳥嘌呤帽結構（m7Gppp）連接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個小時之內對RNA進行加帽，并且保證正確的方向。
本品是按照GMP工藝要求生產，產品以無菌液體形式提供，可應用于體內/體外翻譯前mRNA的加帽反應或mRNA的5'末端標記反應。
產品性質
來源（Source） | 攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
最適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
宿主核酸殘留（Host nucleic acid residue） | <10fg/U |
宿主蛋白殘留（Host protein residue） | <50ppm |
病原體（HBV/ HCV/HIV）檢測 | 無檢出 |
內毒素殘留（Endotoxin residue） | <0.05EU/1000U |
支原體檢測（Mycoplasma detection） | 無檢出 |
無菌檢測（Sterility testing） | 無檢出 |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油 |
活性單位定義（Unit Definition） | 37℃條件下，1小時內將10 pmol GTP（α- 32P）摻入到一條含80個核苷酸（80 nt）轉錄產物上所需要的酶量，即為1個單位。 |
【注】：具體產品質檢數據及更多指標請查看批次質檢報告
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編碼/規格 | |||
10614ES84 （2000U） | 10614ES92 （10000U） | 10614ES94 （20000U） | 10614ES96 （100000U） | ||
10614 | Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 200μL | 1mL | 1mL×2 | 10mL |
運輸和保存方法
冰袋運輸，-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；
2）所提取的RNA需經過純化并使用無核酸酶的水重懸；
3）在加入酶之前需要對RNA溶液進行加熱以去除5'末端的二級結構；
4）對于已知5'末端結構的RNA，可以延長反應時間至60分鐘，提高加帽效率；
5）5'末端標記反應體系中，GTP儲液應稀釋為反應體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反應（反應體系20 μL）
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應，且可根據實驗需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15μL |
10×Capping Buffer | 2.0μL |
GTP（10 mM） | 1.0μL |
SAM（2 mM） | 1.0μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 1.0μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA加帽完成，可進行后續實驗。
2. 5'末端標記反應（反應體系20μL）
本步驟適用于5'末端帶有三磷酸的RNA標記，且可根據實驗需要放大，其標記效率受反應體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14.0μL |
10×Capping Buffer | 2.0μL |
GTP mix | 2.0μL |
SAM（2mM） | 1.0μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10U/μL） | 1.0μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標記物，其中GTP使用濃度參照注意事項5）。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA 5'末端標記完成，可進行后續實驗。
HB220224
