聯系電話
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·12年
具體成交價以合同協議為準
- 聯系人：
- 曹女士
- 電話：
- 400-6111-883
- 手機：
- 售后：
- 4006-111-883
- 傳真：
- 86-21-34615995
- 地址：
- 上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
- 網址：
- www.yeasen.com
掃一掃訪問手機商鋪
產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50 KU |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10617ES97 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
T7 RNA polymerase (1 KU/μL)T7 RNA聚合酶 | 10617ES92 | 10 KU | 972.00 |
10617ES97 | 50 KU | 3832.00 | |
10617ES98 | 500 KU | 36592.00 |
產品描述
本產品是大腸桿菌重組表達來源的噬菌體T7 RNA聚合酶，以含有T7啟動子序列（5’-TAATACGACT CACTATAG*-3’）的雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與啟動子下游的反向單鏈DNA互補的RNA。雙鏈線性平末端或5’突出末端DNA均可作為T7 RNA聚合酶的底物模板，因此線性質粒、PCR產物均可用作體外合成RNA的模板。
注：G*為RNA轉錄的第一個堿基。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | ||
10617ES92(10 KU) | 10617ES97(50 KU) | 10617ES98(500 KU) | ||
10617-A | T7 RNA polymerase (1 KU/μL) | 10 μL | 50 μL | 500 μL |
10617-B | 10×Transcription Buffer | 100 μL | 500 μL | 1 mL×5 |
注：10×Transcription Buffer中含60 mM MgCl2和100 mM DTT，但不含有NTP，如需請購買本公司NTP set solution 10133。
產品應用
1. 單鏈 RNA合成（包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體，以及同位素標記或非同位素標記的RNA探針）
2. 以（Cap analog）為引物合成Capped mRNA
酶活定義
在 37℃、pH8.0 的條件下，1小時內使 1 nmol 的 [3H] GMP 摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。
運輸儲存方法
干冰運輸。-20℃保存，有效期一年。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：100 U 本品和 0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育 4 h，DNA 的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：100 U 本品和 0.5 μg IL23R 質粒，37℃下孵育 4 h，DNA 的電泳譜帶無變化。
Rnase 殘留檢測：100 U 本品和 0.5 μg 293T 細胞總 RNA，37℃下孵育 4 h，RNA 的電泳譜帶無變化。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 本產品僅作科研用途！
應用實例
1、按下列體系配制反應體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
10×Transcription Buffer (Mg2+ Plus) | 2 | 1× |
CTP / GTP/ ATP/ UTP (100 mM each) | 0.4 each | 2 mM each |
T7 RNA Polymerase (1 KU/μL) | 0.5-1 | - |
RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 | - |
RNase free H2O | Up to 18 | - |
模板DNA | 2 (100 ng-1μg) | - |
【注】：
① DNA模板需要最后加入。由于10×Buffer中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。
② Buffer和水建議放置到室溫，然后開始使用，反應于室溫下配制，防止溫度低引起亞精胺沉淀高濃度DNA模板。
③ 若轉錄長度< 100 nt，模板投入量可增加至2μg。
④ RNase inhibitor (40 U/μL)請購買本公司產品10603。
⑤ 為了特定區域的有效轉錄，建議在其區域下游把模板DNA預先切成平端或5′突出末端。
2、37℃反應1-2個小時（若轉錄長度≤ 100 nt，增加時間至4-8h）。
3、反應結束后，使用2U DNaseⅠ（無RNase）37℃ 15分鐘去除DNA模板。
4、轉錄產物純化：體外轉錄產物可選用RNA Cleaner磁珠進行純化（12602），以去除蛋白、鹽離子和其他雜質。也可以采用酚/氯仿純化法（具體操作步驟可聯系Yeasen索取）。
注意事項
1、DNA模板的種類：推薦使用含T7啟動子的線性化質粒和PCR產物作為模板。
2、轉錄模板的純度會顯著影響體外轉錄反應。在質粒DNA抽提過程中殘留的RNase A會顯著影響轉錄RNA的質量。通過酚-氯仿抽提的質粒DNA為最佳模板；PCR產物建議采用膠回收純化后使用。
3、在20 μL反應體系中加入0.02U熱穩定無機焦磷酸酶可顯著提高轉錄產量。
HB210929
