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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10185ES70 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
小鼠組織直接pcr試劑盒
10185ES50
50 T
323.00
Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
小鼠組織直接pcr試劑盒
10185ES70
200 T
983.00
產品描述小鼠組織直接pcr試劑盒可直接快速地對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）樣本進行PCR擴增，具有*的樣本兼容性。本試劑盒配備了強力的裂解緩沖液，可以快速裂解樣品，釋放基因組DNA。裂解液可以直接加入到PCR反應體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾即可進行實驗。
本試劑盒提供的2× Mouse Direct PCR Mix為2倍濃度的熱啟動PCR反應液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
該試劑盒可用于轉基因鑒定、小鼠基因分型等。
產品組分編號
組分
產品編號/規格
10185ES50（50 T）
10185ES70（200 T）
10185-A
Buffer ML
1 mL×5
20 mL×1
10185-B
Buffer MT
0.6 mL
1.25 mL×2
10185-C
2× Mouse Direct PCR Mix
500 μL
1 mL×2
a)Buffer ML 為裂解緩沖液，包含了強力蛋白變性劑，請戴手套操作。
b)Buffer MT 為終止緩沖液，用以終止Buffer ML的裂解功能。
c)2× Mouse Direct PCR Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑、穩定劑和電泳指示染料等。
運輸方法冰袋運輸。
保存方法1. 組分A：2-8℃保存，有效期1年。使長時間多次使用，請分裝凍存，避免交叉污染。
2. 組分B/C：-20℃保存，避免反復凍融。有效期1年。
操作方法樣品基因組DNA釋放
1. 剪取5-10 mg動物組織或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL離心管中；
2. 在上述離心管中加入90 μL Buffer ML，輕輕渦旋使得樣品*被裂解液浸潤，短暫離心；
3. 在恒溫孵育儀中設置95℃孵育15 min；
4. 加入10 μL Buffer MT，輕彈混勻，終止裂解;
5. 選做步驟：12000 rpm離心2 min；
6. 將上清轉移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后續PCR擴增。
【注】：組織應盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。
【注】：95℃孵育，一般15 min即可滿足多數PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至30 min。組織塊不需*裂解，殘余的部分在后續離心步驟中可被除去。
PCR反應鑒定——PCR反應體系
組分
體積（μL）
終濃度
2× Mouse Direct PCR Mix
10
1×
Forward Primer (10 μM)
0.5
0.2-0.4 μM
Reverse Primer (10 μM)
0.5
0.2-0.4 μM
裂解產物（DNA模板）
1
-
ddH2O
補足至 20 μL
-
【注】：各組分使用前應充分混勻。
a）模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μL體系建議采用1 μL上清液作為模板；
b）引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度；
c）反應體系：推薦使用20 μL，也可根據使用習慣調整體系體積大小；
d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
PCR反應鑒定—PCR反應條件循環步驟
溫度
時間
循環數
預變性
94℃
5 min
1
變性
94℃
10 sec
35
退火
60℃
20 sec
延伸
72℃
30 sec/kb
終延伸
72℃
5 min
1
【注】：a）退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設置低于引物理論值 2-5℃。
b）延伸時間：請按30 sec/kb設定。
c）擴增循環數：35個循環已可以擴增足量產物。
d）電泳上樣：取3-5 μL擴增產物上樣即可。
對照反應在PCR結果分析時，不管是陽性結果或陰性結果，如果沒有對照反應，都不能確定結果是否可靠。為了便于后續實驗結果的分析，建議在進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
注意事項
1.為了避免樣本間交叉污染，每次取樣后都需要將取樣器材的刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%次氯酸鈉溶液中，反復洗刷數次，然后用干凈的紙巾擦干殘余液體后再進行使用。為了試驗方便，也可準備多個取樣器材，在使用完后進行統一清洗，確保每一單獨樣本均使用的是無污染的取樣器材。2. 建議使用新鮮的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。
3. 建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率佳。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產品僅作科研用途！
相關產品產品名稱
貨號
規格
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接PCR試劑盒
10184ES50/70
50T/200 T
Animal Tissue PCR Component 動物組織PCR組分
10170ES50/70
50T/200 T
Animal Tissue Lysis Component 動物組織裂解組分
19698ES50/70
50T/200 T
Plant Tissue PCR Kit (With Dye)
10187ES50/70
50T/200 T
常見問題與解決方法常見問題
可能原因
解決方法
陽性對照、待測樣本均無條帶。
PCR反應體系或反應條件不合適。
使用梯度PCR摸索PCR佳反應條件。
PCR試劑保存不當失去活性。
2× Mouse Direct PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
引物設計問題。
嘗試重新設計引物進行檢查。
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。
不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。
使用新鮮的試劑。
加入組織裂解液過量。
增大反應體系，或減少裂解液的用量。
樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。
裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
模板加入量不適合。
在反應體系1-10%范圍內優化模板加入量。
PCR循環數不足。
增加PCR的循環數，推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜，PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環為佳。
非特異性擴增
PCR退火溫度太低，循環數、引物濃度或模板濃度太高。
增加PCR退火溫度，降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。
PCR引物錯配。
重新設計PCR引物。
配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。
PCR反應體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應。
陰性對照出現目的條帶
操作工具或試劑污染。
實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。
樣本間交叉污染。
每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。
HB210824
