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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
|---|
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES10 | 10 U | 96.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES60 | 100 U | 626.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES76 | 500 U | 2356.00 |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase | 10135ES80 | 1000 U | 4256.00 |
產品描述
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經基因工程改造而成。其蛋白結構包含5’→3’聚合酶結構域和經過改造的3’→5’外切酶結構域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了*的延伸因子，擴增速度達到15 sec/kb。本產品配備了優化后的酶緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶具有*的擴增效率和廣泛的模板適應性，非常適合復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編碼/規格 | |||
10135ES10 （10 U） | 10135ES60 （100 U） | 10135ES76 （500 U） | 10135ES80 （1000 U） | ||
10135-A | Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase（2 U/μL） | 5 μL | 50 μL | 250 μL | 2×250 μL |
10135-B | 2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 300 μL | 3×1 mL | 15×1 mL | 30×1 mL |
產品應用
基因克隆；復雜DNA模板擴增；高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚DNA作為模板/引物，74℃，30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
切口酶殘留檢測：10 U本品和0.5 μg IL23R質粒，37℃下孵育4 h，DNA的電泳譜帶無變化。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2）本產品僅作科研用途！
PCR反應體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積 | 終濃度 |
H2O | to 50 μL | - |
2×Canace® PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2.5 μL | 0.5 μM |
Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL) | 0.5 μL | 1 U/50 μL |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之間進行優化，請勿超過2 U/50 μL。
3）聚合酶添加：為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應體系中。
4）Mg2+終濃度：體系終濃度為1.5 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
5）高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴增。
6）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
模板種類 | 擴增片段1 kb-20 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 0.5-3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 10 sec | 30-35 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 15-30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦使用98℃。預變性推薦時間：質粒DNA等簡單模板為30 sec；cDNA、基因組DNA等復雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間推薦如下：質粒DNA等簡單模板為15 sec/kb；cDNA、基因組DNA等復雜模板為30 sec/kb，根據實際情況可延長至40 sec/kb。
4）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產物。擴增產物為平末端，產物直接用于克隆，請使用平末端連接載體。
應用實例
圖1： Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶擴增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可實現高特異性、高產量擴增。模板：擬南芥基因組DNA，50 ng/50 μL；退火溫度：60℃；延伸時間：30 sec/kb。M：1 kb ladder；1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
2×Hieff Canace® PCR Master Mix高保真酶預混液HOT | 10136ES03/08/25 | 1/5/25 mL |
零背景TOPO-TA克隆試劑盒HOT | 10907ES20 | 20 T |
零背景TOPO-TA克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點） | 10908ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT | 10909ES20 | 20 T |
零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點） | 10910ES20 | 20 T |
一步法快速克隆試劑盒HOT | 10911ES25/62 | 25/5×25 T |
多片段一步法快速克隆試劑盒HOT | 10912ES10/50 | 10/5×10 T |
定點突變試劑盒HOT | 11003ES10 | 10 T |
多點突變試劑盒HOT | 11004ES10 | 10 T |
HB210923
