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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10184ES50 | 應用領域 | 生物產業 |
| 主要用途 | 該試劑盒可用于動物基因擴增檢測、轉基因動物基因型鑒定等。 |
產品介紹
Animal Tissue PCR Kit (With Dye)
動物組織直接PCR試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接 PCR 試劑盒 | 10184ES50 | 50T | 433.00 |
Animal Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 動物組織直接 PCR 試劑盒 | 10184ES70 | 200T | 1453.00 |
產品描述
動物組織直接 PCR 試劑盒是一款可直接對不同動物組織進行 PCR 擴增的試劑盒，適應性廣、穩定性強、操作簡易。
本試劑盒采用*的裂解緩沖液體系，可以快速的裂解多種動物組織樣品并釋放出基因組 DNA，如昆蟲足翅、鼠尾、 鼠趾、動物皮膚和內臟等。裂解產物可以用于 DNA 提取純化、也可以直接用于 PCR 反應、也可以在 -20℃ 或以下溫度條件下長期保存備用。
本試劑盒中提供的 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)具有很強的擴增兼容性，不需要額外采用純化提取試劑去除裂解產物中的各種殘骸雜質，能直接以待測樣品裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑為 2 倍濃縮 PCR 反應混合液，包含了用于 PCR 擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化擴增步驟的操作過程，降低污染機率。
該試劑盒可用于動物基因擴增檢測、轉基因動物基因型鑒定等。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | 儲存 | |
10184ES50（50 T） | 10184ES70（200 T） | |||
10184-A | Lysis Buffer | 10 mL | 20 mL × 2 | 2-8℃ |
10184-B | Proteases | 100 μL | 400 μL | -20℃ |
10184-C 10184-D | 2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 5 × PCR Enhancer | 500 μL 200 μL | 1 mL×2 800 μL | -20℃ -20℃ |
a）Lysis Buffer 和 Proteases 兩種組分配合使用于動物組織裂解。
b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 擴增所需要的熱啟動 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚藍染料作為電泳指示劑， PCR 產物可以直接進行電泳。
c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量擴增（如大于65%）時，建議使用5 × PCR Enhancer。
運輸方法
冰袋運輸，有效期1年。
保存方式
1. 試劑 10184-A【Lysis Buffer】為動物組織裂解緩沖液，建議保存于2-8℃。
2. 試劑 10184-B【Proteases】為動物組織裂解劑，使用時請勿長久開蓋，建議保存于-20℃，避免反復凍融。
3. 試劑 10184-C【2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)】，建議保存于-20℃，避免反復凍融。
4. 試劑 10184-D【5 × PCR Enhancer】，建議保存于-20℃，避免反復凍融。
操作方法
1. 在離心管中加入 200 μL Lysis Buffer和2 μL Proteases，輕輕渦旋混勻。
2. 取約 10 mg（長度2 mm左右）動物組織，置于上述離心管中，輕輕渦旋混勻。
3. 55℃孵育5-30 min，然后 95℃處理5 min。
4. 12000 rpm 離心2 min。
5. 將上清轉移至新的離心管，-20℃保存或直接用于 PCR 擴增。
【注】
a）Lysis Buffer 與 Proteases 混合后盡快使用，不宜長期保存；大量樣本操作時，可以將 Lysis Buffer 與 Proteases 按 100 μL:1 μL 的比例混勻備用。
b）組織應取少量并盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。各組織推薦使用量：鼠尾：長度2-4 mm；鼠趾：1-4個；鼠臟器、腦：直徑2-4 mm；斑馬魚、線蟲、果蠅等昆蟲組織：1-4個；細胞數量:105-108個。斑馬魚、線蟲、果蠅等較小樣本的組織，可適當減少Lysis Buffer至50-100 μL。昆蟲等外殼堅硬的樣本，建議剪碎樣本并增加Proteases至4 μL。
c）55℃孵育，一般 5 min 即可滿足多數 PCR 需求，如鼠尾、鼠耳等組織；若需要的 DNA 量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至 30 min 或更久；裂解時間可在5-30 min之間調整，組織塊不需*裂解，殘余的部分在后續離心步驟中可被除去。
PCR反應鑒定——PCR反應體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Tissue Direct PCR Mix（With Dye） | 10 | 1 × |
Forward Primer（10 μM） | 0.5 | 0.25 μM |
Reverse Primer（10 μM） | 0.5 | 0.25 μM |
裂解產物（DNA模板） | 2 | - |
無菌超純水 | To 20 | - |
【注】：各組分使用前應充分混勻。
a）模板使用量：建議總體系的5-20%之間，避免超過總體系的20%。
b）引物終濃度：反應性能較差時，推薦在 0.1- 0.5 μM 范圍內調整引物濃度。
c）反應體系：推薦使用 20 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。
e）對照反應：建議進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。
PCR反應鑒定- PCR反應條件
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 35 |
退火* | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 20 sec | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
*退火溫度：請參考引物的理論 Tm 值，退火溫度可設置低于引物理論值5℃，或通過梯度 PCR 確定///佳溫度。
注意事項：
1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響 PCR 效率。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服、佩戴口///罩、眼罩、一次性手套等采取防護性措施進行實驗操作。
常見問題與解決方法
常見問題 | 可能原因 | 解決方法 |
陽性對照、待測樣本均無條帶。 | PCR反應體系或反應條件不合適。 | 使用梯度PCR摸索PCR//佳反應條件。 |
PCR試劑保存不當失去活性。 | 2× PCR Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。 | |
引物設計問題。 | 嘗試重新設計引物進行檢查。 | |
陽性對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱。 | 不當儲存或長期儲存引起試劑活性喪失。 | 使用新鮮的試劑。 |
加入組織裂解液過量。 | 增大反應體系，或減少裂解液的用量。 | |
樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。 | 裂解混合液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。 | |
模板加入量不適合。 | 在反應體系5-20%范圍內優化模板加入量。 | |
PCR循環數不足。 | 適當增加PCR的循環數，推薦在35-40循環為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的 DNA模板多5-10個循環為佳。 | |
非特異性擴增 | PCR退火溫度太低，循環數、引物濃度或模板濃度太高。 | 提高PCR退火溫度，降低PCR循環數、引物濃度或模板濃度。 |
PCR引物錯配。 | 重新設計PCR引物。 | |
配制PCR反應體系時溫度太高或配制完成后放置時間太久。 | PCR反應體系的配制在低溫下進行，配制完成后盡快進行PCR擴增反應。 | |
陰性對照出現目的條帶 | 操作工具或試劑污染。 | 實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外。 |
樣本間交叉污染。 | 每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。 |
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100 bp DNA ladder | 10507ES60/80 | 100 /10×100 T | 146/1166 | 85/545 |
1 kb DNA ladder HOT | 10510ES60/80 | 100 /10×100 T | 146/1166 | 85/545 |
15000 DNA Marker | 10510ES60/80 | 100 /10×100 T | 146/1166 | 85/545 |
HB201028
