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Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

產品信息

產品描述

cfDNA提取過程中，常會引入大片段DNA或gDNA的污染。常規情況下，這些污染物可以通過對目的片段進行磁珠分選回收而去除。但是，由于cfDNA僅有170 bp左右，常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠對100-200 bp的回收效率較低，無法獲得理想的cfDNA回收效果。

Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是針對上述問題的解決而專門設計的磁珠類產品，其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制備，配合精心優化的緩沖體系和已經驗證的操作體系，可精確回收100-200 bp cfDNA，有效去除大片段DNA和gDNA的污染，同時具有操作簡單、回收率高（>95%）等優勢。使用本品獲得的cfDNA產物，可直接應用二代測序文庫構建、克隆、酶切、連接等反應。本產品中提供的所有試劑組分均經過嚴格質檢，zui高程度保障產品優異性能與批間穩定性。

運輸與保存方法

冰袋運輸。2-8℃保存，效期一年。避免冷凍！

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）磁珠使用前須在室溫平衡至少30 min。

3）80%乙醇需現用現配，否則將影響回收效率。

4）進行長度分選時，初始樣品體積需≥50 μL，不足時請用超純水補齊。樣品體積太小，將導致移液誤差增大，進而影響分選的準確性。

使用方法

1. 準備工作

將磁珠由冰箱中取出，室溫平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 長度分選（雙輪法）

長度分選操作流程如圖1所示，具體操作如下。

圖1 雙輪分選操作流程。

表1磁珠cfDNA-片段回收推薦比例

注：“×”表示樣品DNA體積。若樣品DNA體積為100 mL，則*輪磁珠使用體積為0.47×100 mL=47 mL；第二輪磁珠使用體積為0.33×100 mL=33 mL。

1）請渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證混勻。

2）根據要求，參考表1向DNA溶液中加入第一輪分選磁珠，渦旋混勻或移液器吹打10次混勻。

3）室溫孵育5 min。

4）將離心管短暫離心并置于磁力架中，待溶液澄清后（約5 min），小心轉移上清到干凈的離心管中。【注意：轉移上清時，請勿吸取磁珠，即使微量殘留都將影響后續文庫質量。】

5）參考表1向上清中加入第二輪分選磁珠。

6）渦旋混勻或移液器吹打10次混勻，室溫靜置5 min。

7）將離心管短暫離心并置于磁力架中，待溶液澄清后（約5 min），小心移除上清。

8）保持EP管始終處于磁力架中，加入200 μL新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育30 sec，小心移除上清。

9）重復步驟8。

10）保持離心管始終處于磁力架中，開蓋干燥磁珠至剛剛出現龜裂（約5 min）。【注意：切記磁珠不要干燥時間太久，磁珠干燥過度將影響純化效果。】

11）將離心管從磁力架中取出，加入適量ddH₂O（≥20 μL），渦旋振蕩或使用移液器輕輕吹打充分混勻，室溫靜置5 min。

12）將離心管短暫離心并置于磁力架中分離磁珠和液體。待溶液澄清后（約5 min），小心吸取上清至干凈的管中，即完成分選。

3. 文庫大小分選參考條件

使用Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的雙輪分選比例，回收100-200 bp DNA-片段。結果顯示：Hieff NGS^TM cfDNA Clean Beads的回收率高達95%以上（表2），且幾乎*去除了大片段污染（圖2）。

圖2. 模擬cfDNA純化結果。

陰性對照為20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物（紅色），使用cfDNA Clean Beads對混合物進行0.47×/0.33×分選（綠色和藍色，平行重復）。

表2. 雙輪回收后100-200 bp各片段的回收率統計。

HB170811