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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 11123ES60 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR
(gDNA digester plus)
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES10 | 10 T | -20℃ | 236.00 |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | -20℃ | 955.00 |
產品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而開發的即用型預混液。該酶的熱穩定性大幅度提高，可耐受高達50℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。
該預混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染，保證后續結果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆轉錄反應所需的所有組分（Buffer，dNTP，Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可進行逆轉錄反應，并同時終止gDNA digester的作用，保證cDNA的完整性。
該產品適用于兩步法RT-qPCR檢測，針對qPCR進行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例優化，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區域起始，并具有相同的逆轉錄效率，///大程度保證了qPCR結果的真實性和可重復性。逆轉錄產物兼容SYBR® Green和探針法qPCR，可以根據實驗目的，選擇UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix，Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等試劑配合使用，進行高性能的基因表達分析。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
11123ES10 (10 T) | 11123ES60 (100 T) | ||
11123-A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 2×1 mL |
11123-B | 5×gDNA digester Buffer | 20 μL | 220 μL |
11123-C | gDNA digester | 10 μL | 100 μL |
11123-D | 2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 100 μL | 1 mL |
【注】：2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制劑。
運輸與保存方法
干冰運輸。-20℃保存。
注意事項
1）gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高濃度的甘油，使用前請短暫離心，吹打混勻。
2）建議RNA是溶于水而不是TE Buffer中，因為TE Buffe會干擾gDNA去除以及逆轉錄反應。
3）可以不經過基因組去除步驟，直接進行逆轉錄，這樣所得到的結果與使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat 11120ES) 效果一致。但是請勿將gDNA digester與11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含終止gDNA digester反應的成分，會影響反轉錄和后續的qPCR實驗；
4）反應液的配制應在冰上操作完成，操作過程應避免RNase污染；
5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
第—鏈cDNA合成操作步驟
1. 殘留基因組DNA去除
在RNase free離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。42℃孵育2 min。
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | To 10 μL |
5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
gDNA digester | 1 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
【注】：* 20 μL逆轉錄反應體系建議Total RNA的投入量不超過1 μg。如果目的基因的表達豐度低，多投入5 μg Total RNA，否則RNA投入量過高，可能會超過后續定量PCR的線性范圍。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
在第1步的反應管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus，用移液器輕輕吹打混勻。
組分 | 使用量 |
第1步的反應液 | 10 μL |
2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 10 μL |
3. 逆轉錄程序設置
標準程序（適用于微量和常規量的模板量）
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到50℃。
4. 逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
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