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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 11119ES60 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit | 11119ES60 | 100 T | -20℃ | 755.00 |
產品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit是基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase開發的試劑盒。與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase熱穩定性大幅度提高，可耐受高達50℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達10 kb的cDNA。
試劑盒中包含由總RNA或mRNA合成第一鏈cDNA所需的所有成分，并提供兩種cDNA合成引物：Random Primers N6和oligo (dT)18，合成的單鏈cDNA產物可直接用來進行后續PCR或者qPCR反應。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 |
11119ES60 (100 T) | ||
11119-A | RNase-free H2O | 2×1 mL |
11119-B | 5×Hifair® Ⅱ Buffer | 400 μL |
11119-C | Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 200 μL |
11119-D | Oligo (dT)18 (50 μM) | 100 μL |
11119-E | Random Primers N6 (50 μM) | 100 μL |
【注】：1）5×Hifair® Ⅱ Buffer中包含dNTP。2）Hifair® Ⅱ Enzyme Mix中包含RNase inhibitor。
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。
注意事項
1）反應液的配制應在冰上操作完成，操作過程應避免RNase污染；
2) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3）本產品僅作科研用途！
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 20 μL |
Total RNA | 1 ng -5 μg* |
or mRNA | 1 ng-500 ng* |
5×Hifair® Ⅱ Buffer | 4 μL |
Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL |
or Oligo (dT)18 (50 μM) | or 1 μL |
or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1 μL |
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL |
【可省略】：若后續實驗為PCR，針對復雜模板，可將RNA、H2O、反轉錄引物在65℃孵育5 min 后，迅速冰上冷卻，然后再加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix；若后續實驗為qPCR，則可省略65℃孵育步驟，直接在體系中加入Hifair® Ⅱ Enzyme Mix。
【注】：* 若后續實驗為qPCR，建議Total RNA 或 mRNA投入量不超過1 μg或100 ng，如果目的基因的表達豐度非常低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
42℃ | 30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：
1）熒光定量實驗可以只使用Random Primers N6；也可以1:1與Oligo (dT)18混合使用，效果更好。
2）逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到50℃。
3）逆轉錄產物可以-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
關于引物的選擇
1） 如果模板為真核生物來源，建議選擇Oligo (dT)18 ，與真核生物mRNA的3’ Poly A尾配對，可獲得最高產量的全長cDNA。
2）原核生物RNA的反轉錄請選用Random Primers N6或者基因特異性引物。
3）Random Primers N6適用性較廣，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6進行反轉錄。
4）使用Random primers N6，進行2 kb以下的cDNA合成時，Random primers N6的使用量為 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成時，Random primers N6 的使用量為0.4-1 μL。
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