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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 20201ES76 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
BCA Protein Quantification Kit
BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型） | 20201ES76 | 500T | 278.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型） | 20201ES86 | 2500T | 778.00 |
BCA Protein Quantification Kit BCA蛋白濃度測定試劑盒（增強型） | 20201ES90 | 5000T | 1518.00 |
產品描述
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+，產生一種紫藍色復合物，在562nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。BCA蛋白濃度測定法實現了蛋白質濃度測定的簡便、靈敏、快速和穩定性。試劑盒中提供的蛋白標準品為用戶制作標準曲線提供了便利。
該BCA蛋白濃度測定試劑盒可用于比色皿法檢測，也可用于微孔板法檢測。前者雖需較大量（100μL）的蛋白樣品，但由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:20（v/v），從而降低干擾物質帶來的影響。后者操作簡單方便，僅需少量（10-25μL）的蛋白樣品。不過，由于其在檢測中使用蛋白樣品與BCA工作液的比率為1:8（v/v），某種程度上限制干擾物質的承受濃度以及降低低檢測水平。我司提供三種規格的BCA蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做50次，250次，500次。酶標法分別可做500次，2500次，以及5000次。
產品特點
1）靈敏度高，小檢測蛋白量可達0.2μg，檢測濃度下限達到10μg/mL。
2）速度快，比一般的BCA蛋白濃度測定試劑盒顯色所用時間短。比傳統的Lowry法檢測速度約快4倍。
3）線性范圍廣，20-2000μg/mL濃度范圍內有較好的線性范圍。
4）不受大部分樣品中的化學物質的影響，詳情見附表1。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | 儲存 | ||
20201ES76（500T） | 20201ES86（2500T） | 20201ES90（5000T） | |||
20201-A | BCA試劑A | 100mL | 500mL | 2×500mL | 4℃ |
20201-B | BCA試劑B | 3mL | 15mL | 2×15mL | 4℃ |
20201-C | 蛋白標準品（BSA） | 5×1mL（2mg/mL） | 10×1mL（2mg/mL） | 10×2mL（2mg/mL） | 4℃ |
運輸與保存方法
冰袋運輸。試劑盒中的A、B液室溫或4℃保存；蛋白標準品（BSA）長時間不用，可置于-20℃保存，有效期12個月。
注意事項
1）使用BCA蛋白測定法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，因此需注意保持定時和定溫，以確保精確定量。
2）低溫或長期保存，若發現BCA試劑A或者試劑B有沉淀發生。請37oC溫育并伴隨攪拌促使其充分溶解。如發現細菌污染，則應丟棄，避免對實驗結果造成影響。
3）實驗操作規范，提高上樣量的精確度。
4）每次測定都需做相應的標準曲線，因為顯色反應與溫度和時間的變化有關，精準的蛋白定量宜每次都做標準曲線。
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制標準品和工作液
1. 配制BSA標準品體系
標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。BSA標準品體系配制可參考表1和表2。
表1 BSA標準品體系配制（比色皿檢測，線性范圍20-2000μg/mL）*
Vial | 稀釋液體積（μL） | 2mg/mL BSA體積（μL） | BSA終濃度（μg/mL） |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
*如用比色皿檢測，每管需加100μL標準品，按3個重復計算，每個濃度至少需配制300μL。
表2 BSA標準品體系配制（微孔板檢測，線性范圍20-2000μg/mL）*
Vial | 稀釋液體積（μL） | 2mg/mL BSA體積（μL） | BSA終濃度（μg/mL） |
A | 0 | 30 | 2000 |
B | 9 | 21 | 1400 |
C | 12 | 18 | 1200 |
D | 15 | 15 | 1000 |
E | 21 | 9 | 600 |
F | 24 | 6 | 400 |
G | 27 | 3 | 200 |
H | 49 | 1 | 40 |
I | 30 | 0 | 0=Blank |
2. 配制BCA工作液
1）計算所需要的總BCA工作液體積。
總BCA工作液體積=（標準品+待測樣品）×重復數×每個樣品所需要的BCA工作液
【注】：比色皿檢測時每個樣品加2.0mL BCA工作液，微孔板檢測每個樣品加200μL BCA工作液。
2）配制BCA工作液：50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B（A:B=50:1），充分混勻。
【注】：BCA試劑B加入BCA試劑A中后，迅速渾濁，通過混勻后立即變澄清。BCA工作液裝入密封容器內，室溫條件24h穩定。
二、檢測方法
1. 比色皿檢測方法（樣品：BCA工作液=1:20）
1）各取100μL標準品和待測樣品加入到反應管中。
2）每管加入2.0mL BCA工作液，混勻。37℃孵育30min。
【注】：也可室溫孵育2h，或者60℃孵育30min。BCA檢測蛋白濃度，延長孵育時間會加深顏色反應。升高溫度會加快顯色反應。但是溫度升高和時間延長會降低檢測下限，以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低，可在較高溫度孵育或者適當延長孵育時間。
3）冷卻到室溫。分光光度計檢測，設定波長為562nm。用裝滿水的比色皿對儀器校零。在10分鐘內對所有樣品讀數。
【注】：由于BCA反應達不到真正的反應終點，即使溫度降低至室溫生色反應液會繼續。但是，由于室溫下生色比率相當低，因此若是10min內能對所有的樣本進行562nm吸光度的測試，不會導致明顯錯誤。
4）根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度ug/mL；Y-終的OD562nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
2. 微孔板檢測方法（樣品：BCA工作液=1:8）
1）各取25μL標準品和待測樣品加入到微孔板中。
【注】：樣品與工作液比例為1:8，若樣品有限，可使用10μL標準品和待檢測樣品進行檢測（即1:20），這時試劑盒的檢測范圍為125-2000μg/mL。
2）每孔加入200μl BCA工作液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，37℃孵育30min。
3）冷卻到室溫，在酶標儀上的540-595nm波長范圍處檢測吸光度，其中562nm波長為*。
【注】：a）由于酶標板的光徑比比色皿短，使得酶標板檢測需要更好的樣品：BCA工作比率來獲得相同的檢測靈敏度。若使用高于562nm的檢測波長，建議延長孵育時間到2h。b）延長孵育時間或者提高樣品：BCA工作比會增高每個孔的OD562nm凈值，并且降低檢測下限和工作線性范圍。
4）根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度ug/mL；Y-終的OD562nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
附表：BCA蛋白濃度測定的兼容性
名稱 | 耐受濃度 |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium phosphate | 25mM |
2-Mercaptoethanol | 0.01% |
Glycercol （pure） | 10% |
Glycine-HCl, pH2.8 | 100mM |
HEPES | 100mM |
Hydrochloric acid | 100mM |
Leupeptin | 10mg/L |
Nickel chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
Nonidet P-40 （NP-40） | 5%（w/v） |
Octyl β -glucoside | 5%（w/v） |
Potassium thiocyanate | 3.0M |
SDS | 5% |
Sodium acetate, pH4.8 | 200mM |
Sodium azide | 0.20% |
Sodium hydroxide | 100mM |
Sucrose | 40% |
Triton X-100 | 5% |
Triton X-114, X-305,X-405 | 1% |
Tween-20, Tween-60, Tween-80 | 5% |
Zwittergent | 1% |
ACES, pH7.8 | 25mM |
Acetone | 10% |
Acetonitrile | 10% |
Ammonium sulfate | 1.5mM |
Aprotinin | 10mg/L |
Bicine, pH8.4 | 20Mm |
Bis-Tris, pH6.5 | 33mM |
Borate, pH8.5 | 50mM |
Brij-35 | 5% |
Brij-52 | 1% |
Brij-56, Brij-58 | 1% |
BugBuster protein Extraction Reagent （Cat. No. 70584） | nointerference（undiluted） |
Calcium chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
CelLytic B Reagent | nointerference（undiluted） |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHAPS | 5% |
Cobalt chloride （in TBS, pH8.0） | 0.8mM |
CytoBuster Protein Extraction Reagent （Cat. No. 71009） | nointerference（undiluted） |
Deoxycholic acid | 5% |
Dithioerythritol （DTE） | 1mM |
Dithiothreitol （DTT） | 1mM |
DMF | 10% |
DMSO | 10% |
EDTA | 10mM |
EPPS, pH8.0 | 100mM |
Ethanol | 10% |
Ferric chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
Glucose | 10mM |
Glycerol | 10% |
Guanidine-HCl | 4M |
Imidazole, pH7.0 | 50mM |
MES, PH6.1 | 100mM |
Methanol | 10% |
MOPS, pH7.2 | 100mM |
N-Acetyglucosamine（10mM）in PBS, pH7.2 | 10mM |
Octyl β-thioglucpyranoside | 5% |
PIPES, pH6.8 | 100mM |
PMSF | 1mM |
PopCulture Reagent （Cat. No. 71092） | nointerference（undiluted） |
Reportasol Extraction Buffer （Cat. No. 70909） | nointerference（undiluted） |
Sodium chloride | 1M |
Sodium citrate, pH4.8 or pH6.4 | 200mM |
Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 | 1mM |
Span 20 | 1% |
TBS （150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH8.0） | nointerference（undiluted） |
Thimerosal | 0.01% |
TLCK | 0.1mg/L |
TPCK | 0.1mg/L |
Tricine, pH8.0 | 25mM |
Triethanolamine, pH7.8 | 25mM |
Tris | 250mM |
Tris（hydroxypropyl）phosphine （THP） | 1mM |
Urea | 3M |
Zinc chloride （in TBS, pH8.0） | 10mM |
HB200224
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