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產品簡介
產品介紹
HB170227
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit
細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒 | 40754ES60 | 100次 | -20℃ | 780.00 |
產品描述
細胞衰老（Cell senescence）是細胞控制其生長潛能的保障機制，一般含義是復制衰老（Replicative senescence，RS），指正常細胞經過有限次數的分裂后，停止分裂，此時細胞雖然是存活的，但是細胞形態和生理代謝活性發生明顯變化的現象。體外衰老細胞研究常用的生物學特征包括：1）不可逆的生長停滯；2）與衰老相關的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA-β-gal）的活化。作為溶酶體內的水解酶，通常在pH 4.0的條件下表現活性，但是衰老細胞內其在pH 6.0的條件下表現活性，且隨著傳代次數的增加，細胞群體中表現衰老相關的β-半乳糖苷酶的細胞數目逐漸增加。
本試劑盒正是基于SA -β-gal活性變化的生物學特征而設計的，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下生成深藍色產物，從而在光學顯微鏡下觀察顏色變化以分析細胞的衰老狀況。
本試劑盒可以培養細胞的衰老檢測，也可以用于組織切片的衰老檢測。產品性能穩定，參數經優化，著色敏感，特異性高。僅對衰老細胞進行染色，不會染色衰老前的細胞（presenescent cells）、靜止期細胞（quiescent cells）、永生細胞（immortal cells）或腫瘤細胞。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規格 | 保存 |
40754-A | β-半乳糖苷酶染色液A | 1 ml | -20℃保存 |
40754-B | β-半乳糖苷酶染色液B | 1 ml | -20℃保存 |
40754-C | β-半乳糖苷酶染色液C | 100ml | -20℃保存 |
40754-D | β-半乳糖苷酶染色固定液 | 100 ml | -20℃保存 |
40754-E | X-Gal溶液 | 5 ml | -20℃避光保存 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本試劑盒β-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的腐蝕性和毒性，操作時請注意小心防護。
3）細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH值，不能用于細胞培養的CO2培養箱中進行染色反應。因為CO2培養箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
4）40754-B剛溶解后會觀察到有沉淀，屬正?，F象，充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解，之后才能用于染色實驗。配置染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現，震蕩混勻后就會*溶解。在染色前一定要確保所有的試劑處于*溶解狀態。
5）X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
使用方法
- 實驗前的準備工作：
- 染色工作液配制
實驗開始前，將試劑盒內各組分從冰箱內取出，*溶解。其中X-Gal溶液置入冰槽里等待溶化。根據表1進行染色工作液的配置，實驗體系類型，檢測樣本數，統一配制單次實驗需要的染色工作液總量。
- 1 染色工作液配方表
β-半乳糖苷酶染色液A | 10μl |
β-半乳糖苷酶染色液B | 10μl |
β-半乳糖苷酶染色液C | 930μl |
X-Gal溶液 | 50μl |
【注】配制染色工作液時需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，對于二者的判定：聚丙烯容器可高壓滅菌，而聚苯乙烯容器則不可高壓滅菌，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。但是染色過程可以在聚苯乙烯容器內進行，如細胞培養常用的6孔板。
- 6孔細胞培養板染色（貼壁細胞）：
1）吸除細胞培養液，用PBS/HBSS洗滌細胞1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。
2）吸除固定液，用PBS/HBSS洗滌細胞3次，每次3min。
3）吸除PBS/HBSS，每孔加入1ml預熱的染色工作液，覆蓋整個生長表面。
4）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住6孔板防止液體蒸發。
- 37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
5）普通光學顯微鏡下觀察和計數：表達SA β-gal的細胞為陽性細胞，呈現藍色。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2ml PBS緩沖液，4℃可以保存數天，或者加入封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 懸浮細胞染色：
1）離心收集細胞至1.5ml離心管內，用PBS/HBSS洗滌1次，加入1mlβ-半乳糖苷酶染色固定液。室溫固定15min。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。
2）離心，吸除細胞固定液，用PBS/HBSS洗滌細胞3次，每次3min。
3）離心，吸除PBS/HBSS，每管加入0.5-1ml預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
4）37℃孵育過一晚上。
【注】37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
5）取部分染色好的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，加入1ml PBS緩沖液，4℃可以保存數天。也可取細胞用于涂片，加上封片劑封片后，4℃可保存較長時間。
- 組織切片染色：
1）對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟或水化處理。對于冰凍切片直接按照以下步驟進行；
2）加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15min。
3）用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5min；
4）吸除PBS，加入適當量的預熱的染色工作液。染色工作液的配制方法參見表1。
5）37℃孵育過一晚上，可以用封口膜或保鮮膜封住防止蒸發，把整個切片浸泡在染色工作液中。
- 37℃孵育不能在CO2培養箱中進行，因其內高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值，導致染色失敗。
6）普通光學顯微鏡下觀察和計數。如不能及時觀察計數，加上封片劑封片后4℃可保存較長時間。
