詳細介紹
一、產品簡介
產品名稱 | IL-15,人白介素15ELISA試劑盒現貨 |
檢測方法 | 酶聯免疫法 |
產品種屬 | 人(Human)、大鼠(Rat)、小鼠(Mouse)、豬(PoFAine)、兔(Rabbit)、雞(Chiken)…… |
產品規格 | 96T 48T |
產品品牌 | BIM 滬鼎生物 TSZ |
保存條件 | 短期4℃/長期-20℃保存 |
保 質 期 | 六個月 |
使用目的 | 本試劑盒用于測定血清、血漿及相關液體樣本中產品含量。 |
可測標本 | 血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清液等。 |
運輸環境和儲存環境溫度為2-8℃,避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩定性及試劑的準備將在相關章節中闡述。開封的試劑盒在有效期內穩定,前提是將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環境下。
二、實驗過程中需要用到的器材
1.標準規格酶標儀;
2.高速離心機;
3.電熱恒溫培養箱;
4.干凈的試管和Eppendof管;
5.系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器;
6.蒸餾水,容量瓶等。
三、“IL-15,人白介素15ELISA試劑盒現貨”操作方法
各種類型ELISA測定時一般需經過這些步驟:固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結果。
1.按說明書的要求準備實驗中需用的試劑。
2.ELISA試劑盒中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。
3.從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。
4.試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
四、ELISA結果處理
1.ELISA實驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度標準品的平均OD值,復孔的變異系數應該小于20%。
2.平均OD值減去空白孔的OD值。
3.制作標準曲線。
以減去本底后的OD值為X軸,標準品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數、對數、四參數方程等)并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數據吻合,可以將標準品的濃度作為未知數,將對應的OD值帶入該方程,計算出標準品的濃度,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度zui高的那條曲線。
五、結果判斷
常用下列幾種方法表示結果:
1.定性測定
2.半定量測定 結果一般以滴度表示。
3.定量測定 即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定,繪制標準曲線,結果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應板都必須繪制相應的標準曲線。
六、“”注意事項
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在 4 ℃ 備用,如有特殊 原因需要周期收集標本,
將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條件下保存。避免反復凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
液體類標本:
標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血漿。每個標本量收集體積= 100ul × 檢測種類。取材前須向銷售人員索要說明書。
血清:
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
血漿:
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀
釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS ,緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin ( 抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻
漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。