產品名稱：人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒

產品規格：96T 48T

產品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清、血漿、細胞培養上清等樣品類型 

檢測方法  酶聯免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性 

交叉反應  由于當前的酶聯免疫科學技術和知識有限，現有技術不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此，交叉反應可能仍然存在 

樣 本 量  50-100 μL 

實驗時間  1–4.5h 

儲存條件  2-8°C 

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕 

有 效 期  6 months 

使用優點  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關蛋白，包括細胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號轉導靶標。

■靈敏，準確和*的性能

■用血清、血漿、組織培養上清或裂解產物進行過驗證

■在半天內可完成的現成，方便的檢測

二、人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3.細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5.保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三、人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復5 次，拍干。

7）加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙*拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內，以免影響準確性。

四、“人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒”注意事項：

1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加   樣器。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7）底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手   接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8）加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

五、“人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒”*優勢：

1.嚴格的質控體系：所有試劑盒從原料到成品經過嚴格的質控，確保試劑盒質量及穩定性；

2.產品經過不斷優化，具有很好的靈敏度； 

3.綜合指標特性，研發便捷操作的試劑盒；

4.*分裝：專業的，可靠的實驗結果，優秀的產品質量，低廉的市場價格，實惠、經濟、可靠。

六、注意事項

1.于2-8℃保存，有效期6個月。每次使用前應先平衡至室溫。

2.中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

3.未使用完的板條應密封保存。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗樣本應為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應視為傳染源妥善處理。

七、訂購說明：

1.絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 

2.部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 

3.部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日價格為準。 

4.請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、信息、等形式通知我們。

如何降低人大內皮素(Big ET)ELISA試劑盒背景的步驟：

大家都知道Elisa背景太高，會導致試劑盒檢測失敗，那么背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，根據我司多年經驗。可以嘗試增加洗滌次數。這種封鎖液便宜、不亂，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。假如濃渡過高，或者未準確稀釋，則會導致高背景。常用的蛋白封鎖液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。封鎖液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛伏的結合位點。ELISA實驗的原理好像很簡樸，不過乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封鎖。假如您的背景過高，懷疑封鎖不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封鎖液，或適當延長封鎖時間。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截很多不同類型的分子相互作用。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封鎖液，后者可協助洗滌過程中的封鎖。解決這個題目的一種方法是使用雞或魚的正常血清。好的封鎖液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。
    假如您的ELISA不幸地碰到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統中的組分，并排除可能存在的題目。記住，非特異的抗體結合會增加背景。不外，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會降低特異結合，產生假陰性。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。目前主要有兩種類型的封鎖液：蛋白和非離子型去污劑。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。假如您一直被背景題目所困擾，那么也許您該花些時間來優化封鎖液。