一、人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒的實驗原理

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。

產品名稱：人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒 

產品規格：96T 48T

產品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清、血漿、細胞培養上清等樣品類型 

檢測方法  酶聯免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性 

交叉反應  由于當前的酶聯免疫科學技術和知識有限，現有技術不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此，交叉反應可能仍然存在 

樣 本 量  50-100 μL 

實驗時間  1–4.5h 

儲存條件  2-8°C 

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕 

有 效 期  6 months 

使用優點  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關蛋白，包括細胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號轉導靶標。

■靈敏，準確和*的性能

■用血清、血漿、組織培養上清或裂解產物進行過驗證

■在半天內可完成的現成，方便的檢測

二、人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3.細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5.保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三、人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。分別設標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

3）標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。

注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設置復孔。

4）加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復5 次，拍干。

7）加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙*拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內，以免影響準確性。

四、“人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒”保存：

1.所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將標準品、檢測溶液A、檢測溶液B以及96孔板保存于-20℃。

2.使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

3.試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用。使用后的剩余試劑盒建議在*實驗后1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。

五、注意事項

1.于2-8℃保存，有效期6個月。每次使用前應先平衡至室溫。

2.中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

3.未使用完的板條應密封保存。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗樣本應為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應視為傳染源妥善處理。

六、“人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒”的質量保證：
檢測用所有試劑全部都為進口試劑，適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本，靈敏度*。我們專業的ELISA技術服務，保證對所售任何產品一概負責到底，每一份實驗結果都真實可靠！
A． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
B． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
C． 本試劑不同批號組分不得混用。
D. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

七、保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月

本公司對所有售出的產品保證質量，并提供良好的售后服務，有關產品質量的投訴，請在收到貨物的32天內以書面形式提出，并向我公司技術人員提供相應的材料，我們會及時派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產品本身，不涉及其他間接內容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費代測服務，并提供技術指導。

人補體片斷3a(C3a)ELISA試劑盒檢測中常見問題解析

近幾年來，RDElisa試劑盒已經，酶聯免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點，但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴重一些。因此，我司根據多年的經驗，對RD品牌的Elisa試劑盒常見問題所解析，避免新手對它不了解而耽誤實驗，浪費金錢。以下是一些常見問題，均以我司所供應的品牌試劑盒為例歡迎閱讀參考！
問：加入稀釋劑是否會將樣本進一步稀釋？
答：因為稀釋劑是加入到所有的孔中，標準和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標準曲線讀出，而不需作稀釋調整。
問：我是否可將標準曲線的兩端延伸？
答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結果的可重復性。
問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復制物的中值加兩個標準差從標準曲線換算成分析物的濃度。而zui低標準是我們可以放心的、仍可與標準曲線成直線相關的zui低點，因而是可定量的。
    問：標準曲線為什么要采用4-pl擬合？
    答：滬鼎生物Systems在研發和質控我們絕大多數的QuantikineELISA試劑盒時，采用4-相參數的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數據分析不可用4-pl的話，log-log是下一個的選擇。

用于稀釋高濃度的結合物以配成工作液。為避免結合物在反應中直接吸附在固相載體上，在稀釋緩沖液中常加入高濃度的無關蛋白質(例如 1%牛血清白蛋白)，通過競爭以抑制結合物的吸附。一般還加入具有抑制蛋白質吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20， 0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時，血清標本需稀釋后進行測定，也可應用這種稀釋液。