一、人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒的實驗原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

產(chǎn)品名稱：人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒 

產(chǎn)品規(guī)格：96T 48T

產(chǎn)品品牌：滬鼎生物 TSZ

樣品類型  血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣品類型 

檢測方法  酶聯(lián)免疫法

特 異 性  公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性 

交叉反應(yīng)  由于當(dāng)前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限，現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此，交叉反應(yīng)可能仍然存在 

樣 本 量  50-100 μL 

實驗時間  1–4.5h 

儲存條件  2-8°C 

儲存方法  可以存儲在2 - 8°C長達(dá)1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕 

有 效 期  6 months 

使用優(yōu)點  ELISA試劑盒可特異性定量測定疾病相關(guān)蛋白，包括細(xì)胞因子、趨化因子、β淀粉樣蛋白與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)靶標(biāo)。

■靈敏，準(zhǔn)確和*的性能

■用血清、血漿、組織培養(yǎng)上清或裂解產(chǎn)物進(jìn)行過驗證

■在半天內(nèi)可完成的現(xiàn)成，方便的檢測

二、人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法

1.血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3.細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5.保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三、人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒操作步驟

1）取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

2）分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

3）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品。

注：為減少實驗誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

4）加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

5）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

6）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

7）加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。

8）溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。

9）洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。

10）顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

11）終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。

12）讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性。

四、“人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒”保存：

1.所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A、檢測溶液B以及96孔板保存于-20℃。

2.使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

3.試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實驗需求可分多次使用。使用后的剩余試劑盒建議在*實驗后1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

五、注意事項

1.于2-8℃保存，有效期6個月。每次使用前應(yīng)先平衡至室溫。

2.中終止液具有腐蝕性，要小心使用。

3.未使用完的板條應(yīng)密封保存。

4.瓶蓋每次使用后要擰緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

5.試驗樣本應(yīng)為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應(yīng)視為傳染源妥善處理。

六、“人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒”的質(zhì)量保證：
檢測用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑，適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，靈敏度*。我們專業(yè)的ELISA技術(shù)服務(wù)，保證對所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底，每一份實驗結(jié)果都真實可靠！
A． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
B． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
C． 本試劑不同批號組分不得混用。
D. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

七、保存條件及有效期

1.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個月

本公司對所有售出的產(chǎn)品保證質(zhì)量，并提供良好的售后服務(wù)，有關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量的投訴，請在收到貨物的32天內(nèi)以書面形式提出，并向我公司技術(shù)人員提供相應(yīng)的材料，我們會及時派人解決。所有形式的賠償或退換僅限于產(chǎn)品本身，不涉及其他間接內(nèi)容。凡購買本公司任意款elisa試劑盒，均可享受免費(fèi)代測服務(wù)，并提供技術(shù)指導(dǎo)。

人補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒檢測中常見問題解析

近幾年來，RDElisa試劑盒已經(jīng)，酶聯(lián)免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點，但對實驗操作條件的要求比較嚴(yán)格。實驗條件主要由實驗室的操作環(huán)境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成，但ELISA試劑盒對實驗室操作環(huán)境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的，人為的誤差相對嚴(yán)重一些。因此，我司根據(jù)多年的經(jīng)驗，對RD品牌的Elisa試劑盒常見問題所解析，避免新手對它不了解而耽誤實驗，浪費(fèi)金錢。以下是一些常見問題，均以我司所供應(yīng)的品牌試劑盒為例歡迎閱讀參考！
問：加入稀釋劑是否會將樣本進(jìn)一步稀釋？
答：因為稀釋劑是加入到所有的孔中，標(biāo)準(zhǔn)和被測樣本都被同樣稀釋，所以樣本的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出，而不需作稀釋調(diào)整。
問：我是否可將標(biāo)準(zhǔn)曲線的兩端延伸？
答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實驗結(jié)果。在我們確定的測試范圍，我們保證實驗結(jié)果的可重復(fù)性。
問：為什么不將測試范圍延伸到所述的靈敏度？
答：靈敏度是統(tǒng)計中大于零的可測到的zui低值。它是通過本底信號和試驗的可變性計算出來的。靈敏度是將20個零復(fù)制物的中值加兩個標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點，因而是可定量的。
    問：標(biāo)準(zhǔn)曲線為什么要采用4-pl擬合？
    答：滬鼎生物Systems在研發(fā)和質(zhì)控我們絕大多數(shù)的QuantikineELISA試劑盒時，采用4-相參數(shù)的曲線擬合（又名為4-pl或sigmoidal曲線擬合）。一般來說，它比log-log和直線有更好的曲線擬合。如果數(shù)據(jù)分析不可用4-pl的話，log-log是下一個的選擇。

用于稀釋高濃度的結(jié)合物以配成工作液。為避免結(jié)合物在反應(yīng)中直接吸附在固相載體上，在稀釋緩沖液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)(例如 1%牛血清白蛋白)，通過競爭以抑制結(jié)合物的吸附。一般還加入具有抑制蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20， 0.05%的濃度較為適宜。在間接測定抗體時，血清標(biāo)本需稀釋后進(jìn)行測定，也可應(yīng)用這種稀釋液。