一、人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒檢測概述

    ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務。

二、人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒特點概述

1.專一性強?？乖c抗體的免疫反應是專一反應，而免疫酶技術以免疫反應為基礎，所檢測的對象是抗原(或抗體)，使用的抗體除標記了酶以外，與普通抗體的免疫反應特性并無多大差別。

2.靈敏度高。由于抗體聯結上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗體的結合，大大提高了檢測的靈敏性，使檢測水平接近放射免疫測定法。

3.樣品易保存。經過酶反應顯示的有色產物大多比較穩定，因此有利于樣品的保存。

4.結果易觀察。對檢測結果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計進行比色測定，還可用顯微鏡觀察。這是因為某些酶反應產物能使電子密度發生改變，從而引起被檢測物的顯示。

5.可以定量測定。溶液中的抗原物質，應用酶免吸附技術進行比色測定，依據光密度值的變化，可以定量。預計用細胞分光光度計可對組織內的抗原進行免疫酶技術的定量測定。

6.可以大規模測定樣品。如有成千上萬份樣品需要進行檢測，免疫酶技術都能在較短時間內完成。

7.儀器和試劑簡單。對免疫沒技術來說，不需要熒光顯微鏡，也不需要測定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性儀器與試劑，普通實驗室及生產應用單位均易購置

6、*，質量保證，zui大限度的節省實驗經費。

三、人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒操作流程（具體請參照說明書）

① 加抗體包被 → 4℃過一夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液　→ 37℃ 15分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值

四、人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒常見問題

實驗中zui可能出現問題       

（1）、所有孔未顯色？

分析原因：      

1、微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。          

2、用錯試劑。          

3、在操作中忘記加酶或抗體。     

 解決辦法：            

1、檢查洗板器械，比如洗板機管道是否堵塞、洗液是否用完。          

2、在加樣前，要看清瓶簽。          

3、嚴格按說明書操作步驟進行實驗，確保每步都到位。          

（2）、所有孔顯色偏低？

分析原因：    

1、微孔加入抗體后，洗板不*，微孔中存在游離的抗體。          

2、洗板不干凈。          

3、抗體污染了酶結合物等其它試劑。          

4、溫度沒達到要求。          

5、每孔加入的試劑量低于說明書要求量。      

解決辦法：     

1、手工加蒸餾水洗板時，要避免吸頭接觸微孔，常更換新的蒸餾水。    

2、洗板時要確保每孔都注滿蒸餾水（約400ul），且至少洗板五次。      

3、嚴格按說明書要求操作，每次取樣要更換吸頭。      

4、控制孵育溫度在25℃。       

5、加樣器吸頭安放牢固避免吸樣不足，加樣時務必將吸頭內液體打盡。 

五、人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒儲存方式

試劑盒在4℃下存放不要凍結,4℃保存，有效期六個月，客戶應要求供應商，提供批次試劑盒