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U2932細胞,人彌漫大B細胞株

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更新時間:2024-08-13 19:56:44瀏覽次數:2238

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胞內出現顆粒或空泡。

細胞內如果出現顆粒物質,表明細胞處于非健康狀態。

同樣,細胞內出現空泡也說明細胞處于非健康狀態。

產生空泡可能是老化或是細胞狀態不好。

如果發生在單層細胞:一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征(相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環),則提示該細胞已經死亡,即zui終干枯死亡。

如果發生在懸浮細胞:正常懸浮細胞清晰透明,如胞內出現顆粒或變渾濁表明細胞受損,甚至死亡。

怎樣去除死細胞?單層培養的細胞死亡后,一般會漂浮起來,因此不需要特殊處理。

而懸浮細胞或原代培養細胞則要通過密度離心(如Ficoll梯度)方法收集死細胞。

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 復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。

貼壁細胞傳代:提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長情況。

懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。

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