NK-92MI 細(xì)胞傳代方法 慧穎生物墻裂推薦

產(chǎn)品名稱(chēng)：NK-92MI 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

貨號(hào)：H103

種屬：人

來(lái)源：ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

生長(zhǎng)狀態(tài)：懸浮 淋巴母細(xì)胞養(yǎng) 成團(tuán)聚集

培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基：a-MEM（無(wú)核酸，有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉） +43.2μg/mL Inositol+8.82μg/mL Folic acid+0.1mM 2-巰&基乙醇+12.5%FBS+12.5%HS+1% P/S（推薦HAKATA優(yōu)等胎牛血清，貨號(hào):HN-FBS-50; 馬血清，貨號(hào)：HM-FBS-50）

溫度：37℃     氣相：95%空氣,5% CO2

傳代方法：

用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒，將其豎直置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-4小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái)，打開(kāi)瓶口，小心吸取上層培養(yǎng)基，留2-4ml培養(yǎng)基以將大部分細(xì)胞留在培養(yǎng)瓶底部，加入新鮮培養(yǎng)基。吸取出的舊培養(yǎng)基1000r/min 離心5min后，去除上清，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量決定是合到一起還是另行取新培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液或傳代，每2至3天加入新鮮培養(yǎng)基（根據(jù)細(xì)胞密度）,盡量少用離心的方式換液;

通過(guò)添加新鮮培養(yǎng)基來(lái)維持培養(yǎng)。或者可以通過(guò)離心去除舊培養(yǎng)基，再加入新培養(yǎng)基并以2-3×10⁵個(gè)活細(xì)胞/mL的密度再懸浮進(jìn)行培養(yǎng)。建議將細(xì)胞密度維持在2×10⁵個(gè)至1×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL之間。當(dāng)細(xì)胞團(tuán)過(guò)大時(shí)可輕輕吹打成小細(xì)胞團(tuán)，不要吹打過(guò)度。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案：

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過(guò) 72 小時(shí)）

3.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀(guān)察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀(guān)察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀(guān)察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

保存方法：

凍存條件：90%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。)

保存條件：液氮存儲(chǔ)

僅供研究之用

來(lái)源：慧穎生物，盜圖必究