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改良加藤氏法寄生蟲檢測實驗
寄生蟲病所土源性、特別是5年來全國土源性線蟲病監測工作開展情況;許隆祺研究員詳細講解了土源性線蟲各期蟲體及蟲卵鑒別要點;臧煒助理研究員介紹了2011年修訂的《全國土源性線蟲病監測方案》及“土源性線蟲病專報系統"的填報說明。與會人員也積極發言,相互交流近年來監測點積累的工作經驗,并對下一階段土源性。
改良加藤氏法寄生蟲檢測實驗操作步驟:
1、將尼龍絹片置于待檢糞樣上,用塑料刮片在其上輕刮,使細糞渣透過尼龍絹孔上,取過濾后的糞便。
2、將定量板放在載玻片中部,然后把刮片上的細糞渣填入定量板的圓孔內,使其填滿全孔并抹平、小心移走定量板,使糞樣留在玻片上。
3、取1張浸泡好的親水玻璃紙,抖掉多余的透明液,蓋在糞樣上,用一塊較厚的載玻片輕壓,使糞便均勻地展開于玻璃紙下。
4、將制備好的加藤片放于標本盒內(內墊吸水紙)。
5、編號后置室溫25℃、濕度75%時約1小時或30~36℃溫箱中約半小時后鏡檢。
鏡檢及 結果判斷:
1、鏡檢:將透明好的加藤片置光學顯微鏡的載物臺上,在低倍鏡(10×)下鏡檢。鏡檢仔細檢查每一個視野,并特別注意與未受精蛔蟲卵的鑒定。計數全片蟲卵(計數原則:數上不數下,數左不數右)。
2、加藤片的蟲卵計數:以鏡檢每片檢出的蟲卵數的24倍數(一糞一檢),即為每克糞便蟲卵數(EPG)。
計算3張加藤片的血吸蟲卵數分別為A、B、C,每克糞便蟲卵數(EPG)為:(A+B+C) ×8(一糞三檢)。
注意事項:
1、 每份糞樣需做三張涂片(一糞三檢,以提高檢出率)
2、裁好的玻璃紙要捻開一片片放入透明液中,切忌整疊放入,以免內部浸不透,而影響透明**;浸泡時間不能少于24小時。
3、對薄殼蟲卵,如鉤蟲卵等的透明時間*長不能超過2小時,避免因透明過度而漏檢。
4、糞便過硬時,加少許清水或透明液浸泡片刻,再行刮取。
5、定量板一定要置于載玻片的中部,如果定量板偏于一側,則制片后玻片邊緣的糞膜不能進入鏡檢視野內而產生漏檢。
6.制作標本時,應防止過分干燥,以免蟲卵變形或破裂,以致影響蟲卵鑒別。
7.糞渣透明的速度取決于溫、濕度和糞膜的厚度,一般放置室溫即可,冬天則需置溫箱中以加快透明。如糞膜過厚,則不易尋找蟲卵。
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