脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)測(cè)試盒
【簡(jiǎn)單介紹】
品牌 | 其他品牌 | 貨號(hào) | YSH3530 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 50管/48樣、100管/96樣 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
【詳細(xì)說(shuō)明】
脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)測(cè)試盒
商品詳情:
測(cè)定意義:
脂質(zhì)過(guò)氧化是動(dòng)植物體內(nèi)活性氧(ROS)氧化生物膜的過(guò)程,脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO)是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程的產(chǎn)物,即ROS與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關(guān)的多不飽和脂肪酸的側(cè)鏈及核酸等大分子物質(zhì)起脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)形成LPO,使細(xì)胞膜的流動(dòng)性和通透性發(fā)生改變,最終導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。因此,LPO常被作為機(jī)體氧化應(yīng)激的一種指標(biāo),與某些疾病的病理過(guò)程,如腫瘤、化學(xué)中毒、感染、炎 癥、自身免疫疾病、動(dòng)脈粥樣硬化(AS)及心腦血管疾病,以及?茀?
貨號(hào) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 |
YSH3530 | 100管/96樣 | 微量法 |
YSH3530-1 | 50管/48樣 | 可見(jiàn)分光光度法 |
測(cè)定原理:
LPO在酸性條件下加熱,產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物MDA,MDA與硫代比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產(chǎn)物,在535nm有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提取:
1.按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行室溫勻漿,然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自來(lái)水冷卻后,8000g,,4℃離心10min,上清液置冰上待測(cè)。
2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3.血清等液體:直接檢測(cè)。
計(jì)算公式如下:
1、血清(漿)LAP活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
LAP(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù),9.72×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬(wàn)。
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注意事項(xiàng):
1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測(cè)定的吸光值過(guò)高(高于2.5),用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。
3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無(wú)吸收峰,因此,570nm處測(cè)定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。
4.檢出限為100μmol/L。
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