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5×G250(蛋白定量)
貨號:PC0015
規格:100ml/500ml
Bradford法是常用的蛋白質快速定量方法。
Coomassie brilliant blue G-250與蛋白質結合使染料的大吸收峰由465 nm變為595 nm,溶液的顏色由棕色變為蘭色,595nm波長下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍,與BCA法相當。反應迅速,2分鐘即可達到平衡并在1小時內保持穩定。操作簡便,只需要一種反應試劑。干擾物質少,鈉鉀鎂離子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、硫酸氨、EDTA等均不干擾測定。提供5×染料濃縮液可進行200-400T標準2 ml比色杯檢測,或2500Tmicroplate檢測。
Lowry法包括兩步反應:*步是在堿性條件下,蛋白質與銅作用生成蛋白質-銅絡合物;第二步是此絡合物將Folin試劑還原,產生深藍色,顏色深淺與蛋白質含量成正比。定量范圍為5~100μg/ml蛋白質。Folin試劑顯色反應由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外,不同蛋白質因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強度稍有不同。
Lowry法測定較為不受脂類物質干擾,適于脂類含量較高的樣品測定。也能耐受相當濃度的去垢劑如SDS。
Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似,即在堿性環境下蛋白質與Cu 2+ 絡合并將Cu 2+ 還原成Cu + 。兩分子BCA與一個Cu + 螯合形成穩定的紫藍色復合物,在562 nm處有高的光吸收值并與蛋白質濃度成正比,據此可測定蛋白質濃度。與Lowery法相比,BCA蛋白測定方法靈敏度高,操作簡單,試劑及其形成的顏色復合物穩定性俱佳,在50-200μg/ml濃度范圍內有良好的線性關系,并且受干擾物質影響小。與Bradford法相比,BCA法的顯著優點是不受去垢劑的影響。
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