96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實(shí)驗(yàn)細(xì)則

時(shí)間：2013/1/8閱讀：1609

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備注：本公司銷售的所有產(chǎn)品僅用于生化科研試驗(yàn)

產(chǎn)品名稱 :

96孔板血液gDNA小量提取試劑盒

品牌 :

BIOMIGA

貨號(hào) :

GD2815-01

規(guī)格 :

4*96/20*96/20*96

詳細(xì)資料：

圖片：

開始之前

請(qǐng)閱讀完整的手冊(cè)，以熟悉的EZgene ^TM 96孔的血液DNA試劑盒過程。

1。準(zhǔn)備一個(gè)足夠的的洗脫緩沖和分裝成部分的蛋白酶K原液。存儲(chǔ)每個(gè)等分試樣在-20℃下，在使用前解凍。每個(gè)樣品，將要求25μL該溶液。

升 GD2815-00溶解洗脫緩沖液2.5毫升

升 GD2815-01與10 mL的洗脫緩沖液溶解

升 GD2815-02溶解50.0毫升洗脫緩沖液

2。如下，儲(chǔ)存在室溫下用無水乙醇稀釋DNA濃縮洗滌緩沖液。

升 GD2815-00加入160毫升（96％-100％）乙醇

升 GD2815-01加入640毫升（96％-100％）乙醇

升 GD2815-02加入乙醇，每瓶640毫升（96％-100％）

3。預(yù)熱洗脫緩沖液在65℃下

4。調(diào)整到250μL的樣品的體積。小于250μL的樣品，加入適當(dāng)體積的PBS 250μL。對(duì)于大于250μL的樣品，每個(gè)樣品拆分成兩個(gè)取250μL，并使用1.2 mL圓底孔板溶解的兩口井。到96孔DNA板的各孔中裝入合并的溶胞產(chǎn)物。

儲(chǔ)存的血液樣本

沒有以前的治療的血液樣本的存儲(chǔ)導(dǎo)致產(chǎn)量減少的基因組DNA。的結(jié)果，血標(biāo)本應(yīng)作如下處理，

l對(duì)于短期存儲(chǔ)（一個(gè)星期），在含有EDTA抗凝管收集血液，并儲(chǔ)存于4°C。

l對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，收集管中的血液中含有一種抗凝血?jiǎng)?chǔ)存在-70°C。解凍冷凍血液樣本，在37°C，使用前輕輕攪拌。

EZgene ^TM 96 - 井血液DNA協(xié)議

1。免除25 μL 蛋白酶K（20 毫克/毫升），每孔1.2 mL圓底孔板的底部。每個(gè)樣品標(biāo)記的位置。

2。井的內(nèi)部，而不接觸輪輞與前端部（zui多6 x 10 ⁶淋巴細(xì)胞或培養(yǎng)的細(xì)胞在PBS中可以通過觸摸到圓形孔深孔板的各孔中添加250μL的全 血，血清或體液各孔中使用）。

注：樣品體積小于或大于250μL，調(diào)整樣品體積250μL PBS（開始之前第4頁(yè)上的詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱“）。

3。每個(gè)樣品中加入250μL緩沖液BL。避免接觸的輪輞井的提示，這可能會(huì)導(dǎo)致交叉污染。可選：添加5μL的核糖核酸酶A每口井每250μL 緩沖液BL。添加緩沖BL /核糖核酸酶A組合，以每口井。

4。密封圓形孔板上限（提供）*混合樣品，振蕩30秒或用力搖動(dòng)板（邊到邊）。

注意：搖動(dòng)機(jī)架一側(cè)到另一側(cè)。為了防止可能出現(xiàn)的泄漏周圍微管帽，不搖板和失望。

5。在2000 XG短暫離心收集任何樣本，帽子。

6。孵育樣品在65℃的培養(yǎng)箱中或烤箱10分鐘。混合孵化過程中偶爾輕輕地旋轉(zhuǎn)板。

注意：切勿劇烈振蕩的樣品超過20分鐘。

7。在2000年XG短暫離心收集任何解決方案，從帽。取出微管帽。向每孔中加入2 6 0μL 的無水乙醇（96-100％） 。

8。密封圓形孔板使用新上限（提供）。

9。將樣品混合，通過渦旋或用力搖動(dòng)1分鐘的板（從一側(cè)到另一側(cè)）。在2000年XG短暫離心收集任何液體的上限。

10。將DNA板頂部的2毫升96孔收集板（提供）。馬克的96孔DNA板，以便后面識(shí)別。

11。傳輸從步驟10到96孔DNA板的各孔中的所有樣品。

12。用密封膜密封的96孔DNA板。離心在5000 XG 5-10分鐘。確保所有的樣品已通過膜的DNA板的各孔中。

13。丟棄流過的96孔收集板。刪除的粘合膜的蓋子，然后在各孔中添加400μL緩沖液KB。

14。密封板與新的密封膜，并在5000×g離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄流過的96孔收集板。

15。取出的密封膜的蓋子，然后在各孔中添加700μLDNA洗滌緩沖液。

注：即DNA洗滌緩沖液濃縮物和被提供作為瓶或第4頁(yè)上所示，必須用無水乙醇稀釋。如果是冷藏保存，稀釋的洗滌緩沖液必須冷卻至室溫后再使用。

16。密封板與新的密封膜，并在3000-5000 xg離心5分鐘，然后離心處理，以使板。丟棄的流量，通過在96孔收集板。

17。卸下粘接膜蓋和在各孔中添加600μLDNA洗滌緩沖液。將DNA的2毫升收集板的頂部板96孔，96孔DNA板密封與 ??一個(gè)新的密封膜和離心機(jī)在馬克西速度（5,000 xg離心）10分鐘。

18。取出的密封膜，并在真空烘箱中或在70℃的培養(yǎng)箱預(yù)置為8分鐘，干燥膜孵育96孔DNA板。

注意：這些干燥步驟用于除去的微量乙醇，否則可能會(huì)干擾與下游應(yīng)用是至關(guān)重要的。

19。將96孔DNA板之上的新的安裝機(jī)架的微管（附帶）。添加200μL洗脫緩沖液在65℃下預(yù)熱96孔DNA板的各孔中。兩到四分鐘，在室溫下孵育，或在孵化器設(shè)定在65℃的一到兩分鐘。

20。與一個(gè)新的密封膜密封96孔DNA板和離心處理，以使板在5,000 xg離心5分鐘，以洗脫DNA。

注： *次洗脫通常會(huì)產(chǎn)生60％-70％的DNA綁定到列。另外200μL洗脫緩沖液可以產(chǎn)生另外的20％。 低于50μL的卷，大大降低了產(chǎn)量。

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96孔板血液gDNA小量提取試劑盒實(shí)驗(yàn)細(xì)則

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