轉染各種真核細胞實圖及資料

時間：2013/1/6閱讀：4512

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產品名稱 :

High Efficiency Transfection Reagent

轉染各種真核細胞

品牌 :

BIOMIGA

貨號 :

GT1211-01

規格 :

0.5mL/1ml/1.5ml/6ml

詳細信息 :

說明 :

可用于150次6-孔板或3.5mm培養皿的細胞轉染。

產品說明

GeneTran是一種新型的脂質體和多聚物混合的轉染試劑，可用于各種真核細胞系的質粒轉染，如HEK293、CHO、COS、NIH3T3、MCF-7、PC12、RKO、C2C12、鼠胚胎干細胞和纖維原細胞、間質干細胞、NCCIT、果蠅細胞。同時原代細胞也能轉染，如人腫瘤細胞、大鼠腎上腺嗜鉻細胞、大鼠和小鼠皮質神經細胞、肝細胞等。對于懸浮細胞也有較高的轉染效率和較低的毒性，如HEK 293、小鼠淋巴細胞、昆蟲細胞（sf9, sf21, High-Five）。有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。

主要特點

轉染各種貼壁細胞。

對胚胎干細胞和原代細胞有較高的轉染效率。

對懸浮細胞如HEK293和sf9、sf21、high-five等昆蟲細胞也有很高的轉染效率。在同類產品中具有更高的轉染效率和更低的毒性。有無血清存在（0-20％）對轉染試劑的效果無影響。

可用于單個質粒或多個質粒共轉。

轉染24-72小時后，有高的蛋白表達量。

性價比高

操作簡便

保存條件

GeneTran 可在4℃（切勿放-20℃）至少保存12個月。使用之前請先將試劑瞬時離心。

質粒轉染步驟

以下步驟是用于35mm培養皿或6孔培養板轉染真核細胞的。若用于其他規格培養皿的轉染，請參考表1的用量。所有的數據和體積都是每孔的用量。對于絕大多數的細胞系和原代細胞，質粒DNA和GeneTran的比例按1:2-1:3混合。轉染HEK293細胞可只按1:1混合。有時優化條件也是必須的（參見質粒DNA轉染條件的優化，第5頁）。

A. 轉染貼壁細胞（35 mm培養皿或6孔培養板）

轉染前一天鋪板使轉染時細胞達到60-70%的匯合度。

1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：

2.5 μg    質粒DNA

5 μL       GeneTran

x μL       無血清DMEM（或其他無血清培養基, PBS, DPBS等）

              總體積100 μL

* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40min。

3. 將混合液加入細胞培養皿中，晃動培養皿混勻培養液。放入CO₂培養箱。

注：血清濃度對于轉染效果無影響，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。

4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果檢測到蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養液。

5. 如果要得到穩定細胞株，請在轉染24小時后按1:10傳代培養。

B. 轉染懸浮細胞（35 mm培養皿或6孔培養板）

轉染時保證細胞超過90%的密度

1. 對于每一個轉染樣本，按如下比例配制轉染混合液：

2.5 μg    質粒DNA

5 μL       GeneTran

X μL       無血清DMEM（或其他無血清培養基, PBS, DPBS等）

              總體積100 μL

* 不能在轉染混合液中混有Opti-MEM和血清

2. 用槍頭吹打混勻，放置于室溫20-40分鐘。

3. 將混合液加入細胞培養皿中，晃動培養皿混勻培養液。放入CO₂培養箱。

    注：血清濃度對于轉染效果無影響，經測試高達20%的胎牛血清濃度也不會對轉染效果產生影響。

4. 在轉染后的18-48小時之間，對細胞進行換液。轉染18-48小時之后可檢測基因表達。如果有蛋白表達，請在轉染后4-5天收集培養液。

5. 如果要得到穩定細胞株，請在轉染24小時后按1：10傳代培養。

表1各種細胞培養板轉染推薦用量

培養皿/板

表面積（cm²）

培養液（mL）

混合液（μL）

質粒（μg）

GeneTran

10cm

56

10

500

10

20-30 µL

60mm

21

3

150

3

6-9 µL

35mm

8

2

100

2.5

5-7.5 µL

6孔

9.5

2

100

2.5

5-7.5 µL

12孔

3.8

1

50

1

2-3 µL

24孔

1.9

0.5

25

0.5

1-1.5 µL

48孔

0.95

0.25

12.5

0.25

0.5-0.75 µL

96孔

0.32

0.1

5

0.1

0.2-0.3 µL

質粒轉染條件優化

前面介紹的轉染步驟是針對一般比較好轉的細胞。

對于C2C12肌肉細胞系，FuGENE-6 和Lipofectamine-2000的轉染效率不到10%，而GeneTran按照下面的體系轉染效率可達70%：

6 μg            質粒DNA

12-18 μL    GeneTran

X μL            無血清DMEM（或其他無血清培養基, PBS, DPBS等）

                   總體積100 μL

對于其他細胞系，可參考以下方法優化條件：

A．在35mm培養板中將質粒量增加到3μg，4μg和6μg。

B．在35mm培養板中將GeneTran增加到15μL。

C．如果轉染效率較高，但死細胞較多，可降低質粒量到1μg或更低。也可以減少孵育時間到5-24小時。

D．可按下表優化條件：

問題

DNA

GeneTran

細胞毒性

降到1-2 μg

降到2-3 μL

轉染效率低

對于難轉的細胞增加到4μg

增加到>1:4

對于特別難轉的細胞增加到6μg

增加到>1:4

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轉染各種真核細胞實圖及資料

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