BIOGHSC一步法超級(jí)熒光定量PCR試劑盒(探針)說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品特點(diǎn)
◎逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)一步完成,操作簡(jiǎn)便快速;
◎使用我們研發(fā)的超級(jí)熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性更高,酶動(dòng)力更強(qiáng),特別適合多重PCR反應(yīng);
◎反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,靈敏度高,zui低可檢測(cè)1pg總RNA中的目標(biāo)片段,特別適合低拷貝RNA的檢測(cè);
◎添加了百代生物RT-PCR活素,可明顯提升RT-PCR的產(chǎn)量,CT值一般早3-5循環(huán),S型曲線更加典型。
產(chǎn)品介紹
BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit專(zhuān)為以RNA為模板的定量PCR檢測(cè)而設(shè)計(jì),適合熒光探針?lè)ǘ縋CR分析。使用BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit,逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)一步完成,中間無(wú)開(kāi)管和移液動(dòng)作,操作非常簡(jiǎn)便,也大大提高了實(shí)驗(yàn)的效率,并降低了反應(yīng)的污染風(fēng)險(xiǎn)。BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit使用我們研制優(yōu)化的緩沖液,確保了反轉(zhuǎn)錄和定量PCR反應(yīng)能夠快速、地完成。BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit的檢測(cè)靈敏度可達(dá)到1pg總RNA,與其它品牌的同類(lèi)產(chǎn)品相比,具有更高的檢測(cè)靈敏度。各反應(yīng)成分以 Mix的形式提供,非常方便實(shí)驗(yàn)者使用。
產(chǎn)品成分 反應(yīng)體系
組 分 | 100個(gè)反應(yīng) | 250個(gè)反應(yīng) |
RNase free ddH2O | 1ml | 1.25mlx2 |
2×BIOGHSC Super MultiProbe Mix | 1ml | 1.25mlx2 |
BIOGHSC Super Enzyme Mix | 50ul | 125ul |
RT-PCR Enhancer | 25ul | 62.5ul |
2xBIOGHSC Super MultiProbe Mix | 10μl |
BIOGHSC Super Enzyme Mix | 0.5μl |
RT-PCR Enhancer | 0.25ul |
上下游引物 (10μM) | 各0.6μl |
TaqMan Probe (10μM) | 0.5μl |
模板RNA | 10ng-1μg |
RNase free ddH2O | 加至20µl |
說(shuō)明:1、BIOGHSC Super MultiProbe Mix包含dNTP Mix和Mg2+,BIOGHSC Super Enzyme Mix包含BIOG超級(jí)逆轉(zhuǎn)錄酶和BIOG超級(jí)熱啟動(dòng)聚合酶、熒光保護(hù)素。2、一般來(lái)說(shuō)反應(yīng)體系中引物終濃度為0.3μM可得到較好的擴(kuò)增效果。進(jìn)行多重PCR反應(yīng)時(shí),不同靶基因引物的濃度搭配可以在0.1-1.0μM范圍內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。 3、TaqMan探針終濃度可以在0.1μM-0.45μM之間調(diào)整,進(jìn)行多重PCR反應(yīng)時(shí),不同靶基因探針的濃度搭配應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。4、qPCR反應(yīng)靈敏性高,模板量的準(zhǔn)確性對(duì)結(jié)果影響很大,建議將模板適度稀釋后加入,或用50ul反應(yīng)體系。5、模板體積不超過(guò)反應(yīng)體積的10%。6、擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度請(qǐng)選擇在100bp-500bp范圍內(nèi),為100-200bp。 7、配制反應(yīng)體系時(shí),避免震蕩混勻,以防氣泡產(chǎn)生。8、反應(yīng)條件:先于42℃逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20分鐘,再于95℃加熱10分鐘,以激活熱啟動(dòng)DNA聚合酶,然后95℃ 15秒,60℃ 35秒,35-40個(gè)循環(huán)。該反應(yīng)條件可根據(jù)目標(biāo)片段的大小、引物的Tm值、檢測(cè)基因的多少等適當(dāng)調(diào)整。8、如果模板具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu),可將反應(yīng)溫度提高至55℃,有助于提高產(chǎn)量。
儲(chǔ)存和穩(wěn)定性
干冰或藍(lán)冰運(yùn)輸,-20°C 儲(chǔ)存,避免反復(fù)凍融 。
如每次使用量較少,推薦小份分裝使用。
有效期
-20℃保存條件下,有效期為1年。
質(zhì)量控制
所有組分經(jīng)檢測(cè)均無(wú)核酸外切酶,核酸內(nèi)切酶,RNase殘留。
注意
本產(chǎn)品僅用于科研
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