人白介素6（IL-6）試劑盒的操作說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

    檢測范圍：96T

    0-8ng/L

    使用目的：

    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中白介素6（IL-6）含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素6（IL-6）水平。用純化的人白介素6（IL-6）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素6（IL-6），再與HRP標記的白介素6（IL-6）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素6（IL-6）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人白介素6（IL-6）濃度。

    試劑盒組成

    130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

    2酶標試劑6ml×1瓶8標準品（16ng/L）0.5ml×1瓶

    3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶

    4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

    5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

    6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

    標本要求

    1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    操作步驟

    1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    8ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

    4ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

    1ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

    0.5ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

    2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

    4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

    6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

    7.溫育：操作同3。

    8.洗滌：操作同5。

    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

    10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

    11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

    人白介素6（IL-6）試劑盒注意事項

    1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

    2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

    3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

    4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

    5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

    6．底物請避光保存。

    7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9．本試劑不同批號組分不得混用。

    10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

    保存條件及有效期

    1．試劑盒保存：；2-8℃。

    2．有效期：6個月