細胞質(zhì)量、體積和生長速率是細胞生長發(fā)育和內(nèi)穩(wěn)態(tài)維持的重要生物物理參數(shù)。從1952年開始,人類就開始了活細胞質(zhì)量測定的研究,但直到21世紀,隨著電腦科學(xué)和精密制造工業(yè)的發(fā)展,使得測定細胞質(zhì)量成為可能,同時也出現(xiàn)了多種活細胞質(zhì)量測定的儀器。
細胞質(zhì)量、體積和生長速率影響細胞的大小,而細胞大小的調(diào)控在細胞的生長發(fā)育中普遍存在,但具體的調(diào)控機制知之甚少。細胞大小定量測定有利于對細胞周期中細胞大小和細胞生長調(diào)控的理解。
細胞大小一般通過細胞體積和細胞質(zhì)量來判斷,但細胞體積極易受到滲透壓力、胞內(nèi)水分含量的影響,這些因素都會導(dǎo)致細胞形狀和體積的改變;同時對于一些貼壁生長的細胞來說,進行的細胞大小測定是很困難的。因此,通過細胞體積改變來反應(yīng)細胞大小的變化不具有廣泛的可操作性。相比之下,細胞質(zhì)量作為細胞內(nèi)生物合成和生物降解過程的直接反映,是細胞大小的zui的指示劑。例如,細胞凋亡或死亡、藥物治療對胞內(nèi)合成代謝和降解通路的影響等。
活細胞質(zhì)量測定的方法主要包括:微電子機械系統(tǒng)共振器(MEMSR)、定量相位斷層掃描儀(QPT)、數(shù)字全息顯微鏡(DHM)、定量相位顯微鏡(QPM)。
微電子機械系統(tǒng)共振器
測量共振頻率,作為細胞質(zhì)量的函數(shù),能夠高精度的測量細胞質(zhì)量和細胞生長速率。但環(huán)境因素會極大影響共振頻率測量,導(dǎo)致分辨率較低;測量穩(wěn)定性較差;只能測定懸浮生長的細胞,不能測量貼壁生長的細胞。總之,微電子機械系統(tǒng)共振器適合于對少量的懸浮單細胞進行高靈敏度和高度的質(zhì)量和體積測定。
定量相位斷層掃描儀
定量相位斷層掃描儀通過對細胞進行三維立體掃描,獲得光線通過細胞時在三維空間上的相位轉(zhuǎn)換,從而測定細胞質(zhì)量。特別適用于測量細胞特定厚度范圍內(nèi)的參數(shù)以及測量重疊細胞團中單個細胞的質(zhì)量。但是由于定量相位掃描儀基于復(fù)雜的數(shù)據(jù)獲取、數(shù)據(jù)處理以及復(fù)雜的光路,應(yīng)用受到局限。
數(shù)字全息顯微鏡
通過圖像來記錄全部的相位和強度信息,然后比較樣本和對照組相位和強度的差別,提取出樣本細胞的細胞質(zhì)量信息。數(shù)字全息顯微鏡能夠定測量細胞內(nèi)的干質(zhì)量分布,因此廣泛用于無標(biāo)記跟蹤單細胞內(nèi)細胞器的運動。但由于數(shù)字全息顯微鏡光路復(fù)雜、數(shù)據(jù)處理過程復(fù)雜、且需要使用激光,所有這些導(dǎo)致其不能夠廣泛應(yīng)用。
定量相位顯微鏡
活細胞定量相位成像系統(tǒng)是一款與光學(xué)顯微鏡結(jié)合,致力于生物研究的創(chuàng)新性成像工具。波前傳感器基于創(chuàng)新的四波橫向剪切干涉法來實時的測量生物樣品的相位轉(zhuǎn)換,可以實時觀測活細胞而無需標(biāo)記,并且可以進行統(tǒng)計和定量分析,包括遷移、生長、等。活細胞定量相位成像系統(tǒng)是目前*高分辨率定量相位圖像系統(tǒng),且儀器沒有特殊的光路需求,在領(lǐng)域已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。
綜上所述,活細胞質(zhì)量作為細胞大小的評價指標(biāo),具有極大的生物學(xué)意義。定量相位成像系統(tǒng)以其廣泛的兼容性、創(chuàng)新性、應(yīng)用性,已經(jīng)成為的*儀器,其結(jié)果作為的黃金標(biāo)準(zhǔn),已經(jīng)被客戶廣泛接受。
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