一、范圍：本標準規定了片劑脆碎度檢查方法和操作要求。

          適用于本公司片劑（非包衣片）脆碎度檢查。

二、引用標準：中華人民共和國藥典（2000年版二部附錄）

三、質量指標

四、儀器與用具

1、脆碎儀：（內徑約為286mm，深度為39mm，內壁拋光，一邊可打開的透明耐磨塑料圓筒，筒內有一自中心向外壁延伸的弧形隔片（內徑為80mm+1mm），使圓筒轉動時，片劑產生滾動。圓筒直立固定于水平轉軸上，轉軸與電動機相連，轉速為每分鐘25轉+1轉。每轉動一圈，片劑滾動或滑動至筒壁或其他片劑上。

2、萬分之一天平

3、稱量瓶（扁表：Φ50×30）

4、吹風機

5、鑷子：紗手套

六、操作方法：

1、片重為0.65g或以下者取若干片，使其總重約為6.5g，片重大于0.65g者取10片。用吹風機吹去脫落的粉末，精密稱重，置圓筒中，轉動100次。取出，同法除去粉末，精密稱重，減失重量不得過1%，且不得檢出斷裂，龜裂及粉碎的片。本試驗一般僅作1次。如減失重量超過1%時，可復檢2次，3次的平均減失重量不得過1%，并不得檢出斷裂、龜裂及粉碎的片。

2、如供式品的形狀或大小使片劑在圓筒中形成不規則滾動時，可調節筒的底座，使與桌面成約10⁰的角，試驗時片劑不再聚集，能順利下落。

3、對泡騰片及口嚼片等易吸水的制劑，操作時應注意防止吸濕（通常控制相以濕度小于40%）。

微生物限度檢查操作規程

一、范圍：本標準規定了微生物限度檢查方法和操作要求；

          本標準適應于藥品微生物限度的檢查。

二、引用標準：中國藥典2000年版二部。

三、 微生物限度標準：

注：活螨不得檢出。

四、藥品微生物限度檢查法總則

1、抽樣

1.1  供試品一般按批號隨機抽樣。

1.2  抽樣量一般檢驗用量（2個以上zui小包裝單位）的3倍量。

1.3  抽樣時，凡發現有異常可疑的樣品，應缺陷選有疑問的樣品，但因機械損傷明顯破裂的包裝不得作為樣品，凡已能從藥品、瓶口（外蓋內側及瓶口周圍）外觀看出長螨、長霉、蟲蛀及變質的藥品，可直接判為不合格，無需要再抽樣檢驗。

2、供試品保存

2.2  供試品在檢驗之前，應該保持原有包裝狀態，嚴禁開啟，包裝已開啟的樣品不得作為供試品。

3、檢驗

3.1  供試品檢驗項目按《中國藥典2000年版二部》微生物限度標準（附錄XI J）確定。

3.2 檢驗的全過程，均應嚴格遵守無菌操作，嚴防再污染。

3.3 除另有規定外，供試品制備成供試液后，應在均勻狀態取樣。

3.4 制成供試液后，應該在60分鐘內注皿操作完畢。

4、培養

4.1  除另有規定外，本檢查法中細菌培養溫度為30~35℃，霉菌、酵母菌培養溫度為25~28℃，控制菌培養溫度為36℃±1℃。

5、復檢

5.1  菌數測定不合格者應復檢，控制菌檢查以一次檢出為準，不再復試，但應保留檢出菌株一個月備查。

5.2  復試項目以下不合格項目為準，作單項復試。

5.3  復試需另取同批號樣品，測定2次。

5.4  復試報告，以3次測定結果的算術平均值報告。

6、檢驗報告

6.1  檢驗報告以1g、1ml或10cm²為單位。

6.2  測定菌數報告，以每次測定結果全部平均值報告。

6.3  控制菌按檢驗結果報告，如未檢出控制菌時，報告為“按規定抽樣檢驗結果卡檢出××菌”，如抽樣中任意一樣品檢出控制菌時，報告為“按規定抽樣，檢出××菌，不符合藥品微生物限度標準”。

五、培養基及其制備方法

1、營養瓊脂培狀態養基

取營養瓊脂培養基34g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

2、玫瑰紅鈉瓊脂培養基（虎紅瓊脂培養基）。

取玫瑰紅鈉瓊脂培養基30g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

3、膽鹽乳糖培養基（BL）

十二、檢查法：

1、檢查前的準備：

1.1 用具的洗滌與滅菌。

1.1.1 試管：使用過的試管經消毒后，將培養基倒出，用清潔液洗刷，用水沖洗4-5次，倒立，晾干備用。滅菌前，用棉塞塞上管口，牛皮紙包緊，扎緊。

1.1.2 吸管：使用過的吸管用清潔液浸泡數分鐘后，用水沖洗4-5次，晾干，備用。滅菌前，在吸管上端距0.5cm處塞入約2cm左右的適當疏松棉花，用牛皮紙裹緊。

1.1.3 研缽：使用過的研缽用清潔液洗刷后，用水沖洗數次，晾干備用。滅菌前，用牛皮紙將缽體和錘包裹。

1.1.4 培養皿：使用過的培養皿經消毒后，將培養基倒出，用清潔液洗刷，用水沖洗4-5次，倒立、晾干備用。滅菌前，根據消毒器內經大小用牛皮紙包數個培養皿，扎緊。

1.1.5 將上述包好的用具，放在121的高壓蒸汽消毒器中，滅菌30min后，放入微生物限度檢查室定點位置，備用。

1.2  將所有已滅菌的培養皿、三角瓶、吸管（1ml、10ml）、稀釋劑及供試品等移至無菌室內。每次試驗所用物品必須事先計劃，準備足夠用量，避免操作中出入操作間。將全部包裝（牛皮紙）去掉，編號。

1.3  開啟無菌室紫外線殺菌燈和空氣過濾裝置并使用其工作30min。

1.4 操作人員用肥皂洗手，關閉紫外線殺菌燈，進入緩沖間，換工作鞋，再用0.1%新潔爾滅或用75%乙醇棉球擦手，待干后，穿戴無菌衣、帽、口罩。

1.5 操作前先用75%乙醇棉球擦手，并擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口周圍，待干后將供試品瓶、盒、袋啟封，啟封后先檢查瓶蓋內側及瓶口周圍有無生霉、長螨的跡象，對肉眼可見疑似者，若經證實為生霉、長螨即可判定為不合格，無須繼續檢驗。

2、細菌、霉菌、酵母菌計數。

2.1 檢驗程序：

                                      干燥

2.2 操作步驟：

2.2.1  供試液制備：經陰性對照取樣后，按各類制劑制備供試液的方法（見10供試液的制備）制備。

2.2.2  稀釋及取樣

稀釋：取1ml 吸管1支，吸取混勻的1:10供試液（或原液，1:20供試液）1ml，在離稀釋劑液面上約1cm處，測管壁注入裝有9ml的稀釋劑的的試管中，混勻成1:100 (或1:10，1:200)的稀釋液。

吸樣：用上述吸管分別取1:10供試液（或原液，1:20供試液）1ml，注入2~3個平皿中，以另一支1ml吸管，按上述操作下一級的稀釋與吸取。

2.2.3 注皿與干燥

事先將培養融化，置45℃水浴中，備用，當供試液及各稀釋液均注入平皿后，以上述培養基傾注入平皿，每平皿約15ml，轉動平皿，使樣液與培養基混勻后，置水平臺上待凝。培養基凝固后，在凈化條件下開蓋倒置或換滅菌的陶瓦蓋，使平板干燥，減少平板表面的水分，防止菌落蔓延生長，干燥時間一般在3h左右，干燥時間計入培養時限。

2.2.4 培養：將上述平板倒置于適宜溫度的培養箱中，培養。細菌于30~35℃培養48±2小時，霉菌于25~28℃培養72±2小時。

2.3 菌落計數：

2.3.1 用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。

2.3.2 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時辨，仍以1個或2個以上菌落計數。

2.3.3 平板上有片狀菌落或花斑樣菌落蔓延生長以及平板受到污染的情況，該平板計數無效。

2.3.4 當同一稀釋級使用2個平板時，應采用2個平板菌落數的均值為平均平板菌落數，若2個平板菌落數相差在1倍以上時，該稀釋級不宜采用，但不包括2個平板菌數均在15個以下的情況（15個以下兩平板菌落數允許幅度0-4，1-7，2-9，4-12，5-14，6-15，7-17，8-18，9-19，10-20）。

2.3.5 當同一稀釋級使用3個平板時，應采用3個平板菌落數的均值為平均平板菌落數，若其中1個平板菌落數不能參與平均，但不包括平板菌落數均在10個以下的情況（10個以下平板zui大與zui小菌落數的允許幅度0-3，1-5，2-7，3-9，4-10，6-13，7-14）。

2.4 菌數報告規則

細菌一般宜選取平均平板菌落數在30~300間的稀釋級，作為菌數計算的依據，霉菌宜選取平均菌數在30~100之間的稀釋級作為菌數計算的依據。

2.4.1 若有1個稀釋級的平均平板菌落數處在30~300（30~100）之間時，將該稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數，為報告菌數。

2.4.2 若有2個稀釋級的平均平板菌落數處在30~300（30~100） 之間時，按下式計算兩級比值。

        高稀釋級的平均平板菌落數×稀釋倍數

比值 = ———————————————————

        低稀釋級的平均平板菌落數×稀釋倍數

當比值<2時，以兩級的菌落數均值為報告菌數；

當比值>2時，以低稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。

2.4.3 若有3個稀釋級的平均平板菌數處在30~300（30~100）之間時，采用后2個稀釋級計算級間比值。

當比值<2時，以兩級的菌落數均值為報告菌數；

當比值>2時，以低稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。

2.4.4 若各稀釋級平均平板菌數均在300以上，按zui高的稀釋級的平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數，或適當增中稀釋數，重作測定后報告結果。

2.4.5 若各稀釋級的平均平板菌落數均不在30~300間，其中稀釋級的平均平板菌落數大于300，相鄰稀釋的平均平板菌落數又小于30時，以zui接近30或300的稀釋級平均平板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數。

2.4.6若各稀釋平均平板菌落數均小于30時，按zui低稀釋級的平均板菌落數乘以稀釋倍數為報告菌數，但若應用原液為供試液，當1：10稀釋級與原液的平均平板菌落數相等或大于時，應以培養基稀釋法測定。

2.5 培養基稀釋法：

取供試液（原液或1 :10，1：100 供試液）3份，每份各1ml，分別注入5個平皿內（每皿積壓0.2ml），每個平皿傾注營養瓊脂培養基約15ml，混的菌落數，共得3組數據，以3份供試液菌數的平均值乘以稀釋倍數報告。若各稀釋級平板均無菌落生長，或僅zui低稀釋級平均菌落數小于1時，則報告菌數為小于10個。

2.6 報告數書寫（細菌數報告規則舉例）

2.6.1 菌落數在100個以內時，按實測數書寫報告。

2.6.2 菌落數大于100時，取二位有效數字，第三位數按有關數字處理規格處理，為簡便計，也可用10的指數報告。

2.7 不得按計數規則報告的情況

2.7.1 空白對照平板有菌生長，表明培養基已補污染；

2.7.2 各稀釋級平板上生產的菌落數不符合10倍遞增稀釋規律，菌數顯示混亂；

2.7.3 同一稀釋級的兩個平板上生長的菌落數均在15個以上，但菌數相關一倍以上；

2.7.4 菌落蔓延生覆蓋整個平板無法計數；

出現以上情況，該次實驗數據不得計數報告。

3、大腸桿菌檢查法；

3.1 檢驗程序（見附頁）

3.2 操作步驟

3.2.1 取膽鹽乳糖培養基3份，每份100ml，2份分別加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌50~100個作陽性對照，第3份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對照。培養18~24小時（必要可延至48小時）。陰性對照應無菌生長。取上述3份的培養物各0.2ml，分別接種至5ml MUG培養基管

內培養，分別于5小時與24小時時，取未接種的MUG培養基管作本底對照，將各管置365nm紫外光下觀察。陽性對照管呈現熒光，MUG陽性。供試液的MUG管呈現熒光，MUG陽性；無熒光，MUG陰性。然后加數滴靛基質試液于MUG管內，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。

    當陰性對呈陰性，陽性對照正常生長，供試液膽鹽乳糖培養基培養液澄明，并證明無菌生產，判未檢出大腸桿菌。供試液MUG陽性，靛基質陽性，判檢出在腸桿菌；MUG陰性，靛基質陰性，判未檢出大腸桿菌。

    3.2.2 如MUG陽性、靛基質陰性，或MUG陰性、靛基質陽性，均應取從試液膽鹽乳糖培養基培養物劃線于曙紅亞甲藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板，培養18~24小時，如上述供試液培養物的分離平板無菌落生長，判未檢出大腸桿菌。或有菌落生長，應挑選2~3可疑菌落作靛基質試驗（1）、甲基紅試驗（M）、乙酰甲基甲醇生成試（V-P）、枸櫞酸鹽利用試驗（C）及革蘭染色、鏡檢，按（12，2，3）規定判斷結果。

    3.2.3 靛基質試驗（1），取可疑菌落或斜面培養物，接種于蛋白胨水培養基中，培養24小時，沿管壁加入靛基質試液數滴，液面呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。

    3.2.4 甲基紅試驗（M），取可疑菌數或斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄胨水培基中，培養48小時±2小時，于管內加入甲基紅指示液數滴，立即觀察，呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈黃色為陰性。

    3.2.5 乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P），取可疑菌落或斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖礴水培養基中，培養48小時±2小時，于每2ml培養液中加入 -萘酚乙醇試液1ml，混勻，再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，在4小時內出現紅色為陽性，無紅色反應為陰性。

    3.2.6 枸櫞酸鹽利用試驗（C） ，取可疑菌落或斜面培養物，接種于枸櫞酸鹽培養基的斜面上，一般培養48~72小時，培養基斜面有菌落生長，培養基由綠色變為藍色時為陽性，培養基顏色無改變為陰性。

    3.2.7 革蘭氏染色法、鏡檢

    試劑；

結晶紫染液：取結晶紫1.0g溶于95%乙醇20ml，與1%草酸銨溶液80ml混勻，靜置48h備用。

革蘭氏碘液，先用3~5ml蒸餾水溶解2.0g碘化鉀，再加入磺片1.0g，待全溶后，加蒸餾水稀釋至300ml，備用。

沙黃（蕃紅）染液：將沙黃0.25g溶于95%乙醇10ml中，待全溶解后再加蒸餾水至100ml，即可。

染色法：用接種環沾取無菌水，置于潔凈載玻片上，再挑取少許菌苔，輕輕研開，使均勻。涂片自然風干或微熱烤干，而后通過火焰2~3次以固定涂片。滴加結晶紫梁液，染色1分鐘，水洗，滴加磺液媒染1分鐘，水洗，甩干余水，滴加95%乙醇脫色，約20~30秒，水洗，吸干，滴加沙黃復染液，染1分鐘，水洗，待干，鏡檢。

染色結果：革蘭氏陽性菌呈藍紫色，陰性菌呈紅色。

3.3 結果判斷見下表：

3.3.1 對與MUG-1反應不符合可疑菌株。如表中（1）出現++--或（2）出現-+--，均應重新分離菌株，再作MUG-1和IMVic試驗。

4、活螨檢查法：

4.1 設備和材料

    顯微鏡、雙筒實體顯微鏡

    放大鏡

    解剖針、發絲針、小毛筆

    載玻片、蓋玻片

    酒精燈

    培養皿或小搪瓷盤（內襯黑色）

    30%甘油水

    4.2螨的形態特征

    螨的體形微小，多在1mm以下，一般呈卵圓形或橢圓形、無頭胸、腹界限。幼螨足三對，若螨足四對，成螨足多數為四對。足通常由六節組成。口器向前突出，螯肢常呈螯鉗狀，由2-3節組成。須肢節數因種類而異，

由1-2節到5節組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端或兩側有1-2對眼。軀體兩側對稱，表面有被有堅硬的幾丁質的板，保護其內部器官和支持肌肉固定。體表有剛毛，它的形狀、數目及彼此長短比例和排列位置因種類而異。

    螨類與蜘蛛、昆蟲（書虱），外形比較的近似，因此，必須注意它們之間的主要區別，見下表：

螨與蜘蝗、昆蟲主要形態鑒別

4.3 檢查方法：

4.3.1 直檢法：取供試品先用肉眼觀察，有無疑似活螨的白點或其它顏色的點狀物，再用5-10倍放大鏡或雙筒實體顯微鏡檢視，有螨者，用解剖針或發絲針或小毛筆挑取活螨放在滴一滴甘油水的載玻片上，置顯微鏡下觀察。

4.3.2 漂浮法：將供試品放在盛大有飽和食鹽水的扁形稱量瓶或適宜的容器內，加飽和食鹽水至容器的三分之二處，攪拌均勻，置10倍放大鏡或雙筒實體顯微鏡下檢查，或繼續加飽和食鹽水至瓶口處（為防止鹽水和樣品溢出污染桌面，宜將上述容器放在裝有適量甘油水的培養皿中），用潔凈的載玻片蓋在瓶口上，使玻片與液面接觸，沾取液面上的漂浮物，置顯微鏡下檢查。

4.3.3 分離法：也稱烤螨法。將供試品放在特制的分離器或附有孔徑大小適宜的篩網的普法玻璃漏斗里，利用活螨避銚、怕熱的習性，在漏斗的廣口上面放一個60~100W的燈泡，距離藥品約6cm處，照射1-2小時。活螨可沿著漏斗內的底部*內壁向下爬，用小燒杯裝半杯甘油水，放在漏斗的下口處，收集爬出來的活螨。

4.4 活螨卵的檢驗方法：

螨卵極小，一般在0.1mm以正是，呈乳白色，橢圓形或卵圓形。須用10-20倍放大鏡或顯微鏡方可查見。螨卵常見于活螨的周圍，但在未檢出活螨的樣品中，亦有檢出螨卵者。一般在供試品中已經檢出活螨的，不再進行螨卵的檢查。對可疑供試品，未檢出活螨時，可注意檢查活螨卵。

檢驗方法：可采用檢驗活螨項下的直檢法或漂浮法檢查。凡用上述由1-2節到5節組成，一般呈爪或鉗狀，偶爾為長形。有些種類在軀體前端或兩側有1-2對眼。軀體兩側對稱，表面有被有堅硬的幾丁質的板，保護其內部器官和支持肌肉固定。體表有剛毛，它的形狀、數目及彼此長短比例和排列位置因種類而異。

    螨類與蜘蛛、昆蟲（書虱），外形比較的近似，因此，必須注意它們之間的主要區別，見下表：

螨與蜘蝗、昆蟲主要形態鑒別

4.3 檢查方法：

4.3.1 直檢法：取供試品先用肉眼觀察，有無疑似活螨的白點或其它顏色的點狀物，再用5-10倍放大鏡或雙筒實體顯微鏡檢視，有螨者，用解剖針或發絲針或小毛筆挑取活螨放在滴一滴甘油水的載玻片上，置顯微鏡下觀察。

4.3.2 漂浮法：將供試品放在盛大有飽和食鹽水的扁形稱量瓶或適宜的容器內，加飽和食鹽水至容器的三分之二處，攪拌均勻，置10倍放大鏡或雙筒實體顯微鏡下檢查，或繼續加飽和食鹽水至瓶口處（為防止鹽水和樣品溢出污染桌面，宜將上述容器放在裝有適量甘油水的培養皿中），用潔凈的載玻片蓋在瓶口上，使玻片與液面接觸，沾取液面上的漂浮物，置顯微鏡下檢查。

4.3.3 分離法：也稱烤螨法。將供試品放在特制的分離器或附有孔徑大小適宜的篩網的普法玻璃漏斗里，利用活螨避銚、怕熱的習性，在漏斗的廣口上面放一個60~100W的燈泡，距離藥品約6cm處，照射1-2小時。活螨可沿著漏斗內的底部*內壁向下爬，用小燒杯裝半杯甘油水，放在漏斗的下口處，收集爬出來的活螨。

4.4 活螨卵的檢驗方法：

螨卵極小，一般在0.1mm以正是，呈乳白色，橢圓形或卵圓形。須用10-20倍放大鏡或顯微鏡方可查見。螨卵常見于活螨的周圍，但在未檢出活螨的樣品中，亦有檢出螨卵者。一般在供試品中已經檢出活螨的，不再進行螨卵的檢查。對可疑供試品，未檢出活螨時，可注意檢查活螨卵。

*MUG管紫外觀察，顯熒光為陽性，MUG+；

                  無熒光為陰性，MUG-。

*MUG管靛基質顯色，MUG管內，液面呈玫瑰紅為陽性，I+；

                                液面呈試劑本色為陰性，I-。

檢驗方法：可采用檢驗活螨項下的直檢法或漂浮法檢查。凡用上述

取膽鹽乳糖培養基36g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

4、麥康凱瓊脂培養基（MacC）

取麥康凱瓊脂培養基54g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

5、磷酸鹽葡萄胨水培養基15.8g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

6、蛋白胨水培養基

取蛋白胨水培養基15g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

7、枸櫞酸鹽培養基

取枸櫞酸鹽培養基22g，加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，116℃高壓滅菌20分鐘。

8、4-甲基傘形酮葡萄苷酸培養基（MUG）

取4-甲基傘形酮葡萄苷酸培養  g，加1000ml蒸餾水，分裝，115℃高壓滅菌20分鐘。

注：培養基（生物試劑）中國藥品生物制品檢定所生產。

六、試液

1、0.1%2，3，5-氯化三苯基四氮性（TTC）溶液。

1.1 配制：取2，3，5-氯化三苯基四氮唑0.1g溶于100ml蒸餾水，滅菌，備用。

1.2  用途：供制備培養基用。

2、無菌對氨基苯甲酸試液

2.1  配制：取對氨基苯甲酸0.1g，加入含10ml水的具塞試管中，121℃滅菌20分鐘。

2.2  用途：供磺胺類藥物檢驗用。

3、氫氧化鉀試液

3.1  配制：取氫氧化鉀40g，加水溶解使成100ml。

3.2  用途：供作V-P反應試劑。

4、 -萘酚乙醇溶液

4.1  配制：取 -萘酚6.0g，加無水乙醇溶解使成100ml。

4.2  用途：供作V-P反應試劑。

5、靛基質試液

七、稀釋劑

1、0.9%無菌氯化鈉溶液

取氯化鈉9.0g，加水溶解使成1000ml，121℃滅菌20分鐘。

2、無菌磷酸鹽緩沖液（PH7.2）

取磷酸氫二鈉25.8g與磷酸二氫鈉4.4g，加水稀釋至1000ml，121℃滅菌20分鐘。

八、指示液

1、甲基紅指示液

取甲基紅0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml，即得。

2、溴麝香草酚指示液

取溴麝香草酚藍0.4g，加1mol/L氫氧化鈉溶液0.64ml使溶解，再加水至100ml，變色范圍6.0~7.6（黃—藍）

九、供試品的檢驗量：

1、每批供試品檢驗量一般為10g 或10ml，化學膜劑為100cm2，貴重的或微量包裝的供試品檢驗量可酌減，但口服藥品不得少于3g，外用藥品不得少于5g。

2、供試品須取自2個以上的包裝單位。

十、供試液的制備

1、液體供試品：取供試品10ml，加入稀釋劑90ml，混勻，作為供試液。

2、固體供試品：取供試品10g，置0.9%無菌氯化鈉溶液100ml中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻后，作為供試液。

3、腸溶膠囊（片）供試品：取供試品10g，置含有無菌磷酸鹽緩沖液（PH6.8）100ml的錐形瓶內，于45℃水浴中，保溫，振搖，使溶解，作為供試液。

4、含抑菌成分供試品的供試液制備方法：

4.1 離心沉淀法：

可溶性供試液：取供試液10ml，置入刻度離心管中，以3000轉/分以上離心沉淀30分鐘，用毛細管吸取上清液棄掉，留下管底約2ml殘余液，將其全部洗入增菌培養基中，作控制菌檢查。

混懸供試液：取供試液 10ml，置刻度離心管中，先以500轉/分離心沉淀5分鐘，取其上清液移入另一離心管中，再經3000轉/分以上離心沉淀30分鐘，棄去上清液，保留約2ml殘余液，全部洗入增菌培養基中，作控制菌檢驗。

4.2 鈍化劑中和法：

磺胺類藥物中和法：取規定量的供試液，加入含有無菌1%對氨基苯甲酸試液0.5ml的100ml增菌液中，作增菌培養即可。

4.3沉降法：

取規定量的供試液，自然沉降5分鐘，吸取上層液于含1%的氨基苯甲酸1ml的增菌液，作增菌培養即得。

十二、對照試驗：

1.1  陰性對照試驗：測試檢驗全過程無菌技術的可靠性。

1.2  控制菌檢驗陰性對照試驗：用吸管從供用的稀釋劑中吸取1ml于增菌液中，按控制菌檢驗方法檢查，不得長菌。

2、陽性對照試驗：檢查供試品是否對控制菌生長產生干擾作用及檢查培養條件是否適宜。

2.1 陽性對照試驗：方法同供試品檢驗，于供試液中加入一定量的相應對照菌，作為平行試驗。

2.2 規定陽性對照株：大腸桿菌[CMCC（B）44102]

2.3對照菌的加入量為50-100個，可事先前預先確定，需氣菌常用計數方法，取36℃±1℃培養18~20小時的新鮮肉湯培養物，10倍遞增稀釋至10^-6，取其0.1ml于營養瓊脂平板表面涂抹或取10^-7稀釋液1ml以注皿法進行菌數測定。

2.4 當供試品未檢出控制菌時，而陽性對照試驗也未能檢出，不能做出供試品未檢出控制菌的結論。

2.5 陽性對照試驗操作必須與供試品檢驗作嚴格分開，避免交叉污染。