引言 
抗氧化劑即為防止或延緩飼料中某些活性成分發(fā)生氧化
變質(zhì)而添加于飼料中的制劑。主要用于含有高脂肪的飼
料，以防止脂肪氧化酸敗變質(zhì)，也常用于含維生素的預(yù)
混料中，它可防止維生素的氧化失效。我國《食品添加
劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760—1996）中規(guī)定：丁基羥基茴
香醚可用于食用油脂、油炸食品、干魚制品、餅干、方
便面、速煮米、果仁罐頭、腌臘肉制品、早餐谷類食品，
其zui大使用量為 0.2g/kg。丁基羥基茴香醚與二丁基羥基
甲苯、沒食子酸丙酯混合使用時，其中丁基羥基茴香醚
與二丁基羥基甲苯總量不得超過 0.1 g/kg，沒食子酸丙酯
不得超過 0.05 g/kg（使用量均以脂肪計(jì)）。此外也可用
于膠姆糖配料。目前飼料中的抗氧化劑的測定方法主要有液相色譜
法 [1]、氣相色譜法 [2] 等。相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)方法為 GB/T 17814-
2011 飼料中丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯
（BHT）、乙氧喹 (EQ) 和沒食子酸丙酯（PG）的測定。由
于沒食子酸丙酯的化學(xué)性質(zhì)決定了該物質(zhì)不適用于氣相
色譜法測定，故該標(biāo)準(zhǔn)中未將 PG 列入氣相色譜法的檢測
項(xiàng)目中。本方法依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)方法，開發(fā)了飼料中的三種
抗氧化劑的同時測定的方法，對前處理方法做了少許改
動，以增強(qiáng)該方法的適用性。

儀器
Trace1310氣相色譜儀，配FID檢測器（Thermo Scientific）；
AS1310 自動進(jìn)樣器（Thermo Scientific）
離心機(jī)、天平、漩渦混合器（Thermo Scientific）
耗材
色譜柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）（Thermo 
Scientific, PN 26098-1420）
C18 吸附劑：40-60 µm。（Thermo Scientific）
試劑與標(biāo)準(zhǔn)品
丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、乙氧喹標(biāo)準(zhǔn)品：含
量≥ 99%；
乙腈、正己烷：色譜純 (Thermofisher)；氯化鈉，分析純
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
儲備液：準(zhǔn)確稱取 10.0mg 丁基羥基茴香醚、二丁基羥基
甲苯、乙氧喹標(biāo)準(zhǔn)品，分別用正己烷溶解稀釋并定容至
10mL，得到 1000mg/L 標(biāo)準(zhǔn)儲備液，儲存在冰箱中備用。

標(biāo)準(zhǔn)中間液：上述儲備液分別移取 1mL，用正己烷稀釋
定容至 100mL，得濃度為 10mg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。
樣品前處理
準(zhǔn)確稱取粉碎后的飼料樣品 1.0g，加 7mL 水浸泡，再加
10mL 乙腈和 1.0gNaCl，振蕩提取 3min，然后以 10000rpm
的速度冷凍離心，離心后取上清液 2mL 加 C18 吸附劑和
無水硫酸鎂各100mg，振蕩后過0.22µm濾膜后上機(jī)分析。
實(shí)驗(yàn)條件
色譜柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；
柱溫：50℃（1 min），20℃ /min 到 250℃（5 min）；
進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣，分流比：20:1，進(jìn)樣量：1 µL；進(jìn)樣口溫度：250℃；
載氣：高純氮?dú)猓?9.999%），恒流模式，1.2 mL/min；
檢測器溫度：250℃，氫氣 35mL/min，空氣 350mL/min，尾
吹氣氮?dú)?40mL/min。
結(jié)果與討論
色譜柱的選擇：分別用極性不同的 TG-WAX（30 m
×0.25 mm×0.25 μm）和 TG-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm）
兩根色譜柱對所測三種物質(zhì)進(jìn)行分離，結(jié)果表明 TG-WAX
柱對 BHA 和 EQ 的分離效果較差，不能達(dá)到基線分離，而
TG-5 色譜柱對三種物質(zhì)能夠達(dá)到有效分離（見圖 1）。所
以選用TG-5色譜柱作為本實(shí)驗(yàn)中使用的色譜柱。

提取溶劑的選擇：分別用極性溶劑（乙腈）和非極性溶
劑（正己烷）來提取飼料中的抗氧化劑，比較提取的效率。
結(jié)果表明，乙腈對這三種抗氧化劑的提取效率要高于正
己烷的提取，提取液進(jìn)樣用氣相色譜儀分析（圖 2），可
看出，正己烷提取液含雜質(zhì)也較多，對分析物的測定有
一定干擾，而乙腈提取液相對潔凈。因此在本實(shí)驗(yàn)中選
取乙腈為提取溶劑。凈化方法的選擇：按照標(biāo)準(zhǔn)方法中，提取液過弗羅里硅
土柱凈化，二氯甲烷-丙酮混合溶劑洗脫，BHT回收率極低。
考慮到乙腈提取液雜質(zhì)并不多，因此放棄固相萃取小柱
凈化的方法，采用分散固相萃取的方法凈化，向提取液
中加入C18吸附劑振蕩除雜，操作簡單，目標(biāo)物無損失。

線性關(guān)系及測定低限：準(zhǔn)確移取適量抗氧化劑混合標(biāo)準(zhǔn)
中間液，分別用正己烷稀釋配制得到濃度為0.1、0.5、1、2、
5 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供氣相色譜質(zhì)譜測定。以測定峰面
積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)
曲線如圖 3。方法檢出限以 3 倍信噪比計(jì)算得到，本方法
測定飼料中的 3 種抗氧化劑的檢出限為1mg/kg。

回收率及精密度實(shí)驗(yàn)：用標(biāo)準(zhǔn)添加法，在飼料樣品中，添
加抗氧化劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，按上述方法
進(jìn)行提取、凈化和測定，飼料樣品添加濃度為 3mg/kg 和
30mg/kg兩個水平，各做3個平行，樣品、添加譜圖見圖4，
結(jié)果見表 1。

結(jié)論
飼料中的抗氧化劑經(jīng)乙腈提取，分散固相萃取的方法
凈化，采用賽默飛世爾新型氣相色譜儀進(jìn)行檢測。結(jié)
果表明該方法操作簡單，提取效率高，回收率和重現(xiàn)
性均能滿足實(shí)驗(yàn)室日常檢測的要求。