鯉魚卵黃蛋白原ELISA試劑盒標本及采集、貯運
(1)鯉魚卵黃蛋白原ELISA試劑盒嚴重溶血,以HRP 為標記的ELISA 測定中,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
(2)混有紅細胞的血清 易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈;
(3)如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應;
(4)標本凝固不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA 測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;
(5)采血試管洗滌不*、反復使用易交叉污染;
(6)塑料試管能吸附抗原物質 ,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。
ELISA結果判定常用的幾種方法:
1)目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照;與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
2)以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3)以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性;P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑;P/N小于1.5為陰性。
4)定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
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