飼料中的氯霉素的測(cè)定 - 氣相色譜法

引言

氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一種廣泛使用的廣譜類

抗生素，由于它對(duì)人體具有嚴(yán)重的毒副作用 [1]

，醫(yī)學(xué)界至

今還沒(méi)有確定氯霉素的人體安全接觸劑量。美國(guó)和歐盟都

禁止在食用性動(dòng)物和動(dòng)物飼料中使用氯霉素 [2]

，在法規(guī)中

CAP 的殘留量為不得檢出。

氣相色譜的 ECD 檢測(cè)器對(duì)于具有強(qiáng)電子親和力的化合物有

較高的靈敏度，而本實(shí)驗(yàn)采用 Thermo Scientific Trace1310 氣

相色譜，在分析飼料中的氯霉素時(shí)，簡(jiǎn)單、方便，重現(xiàn)性好。

儀器與試劑

Trace 1310氣相色譜儀，配備了SSL（分流/不分流進(jìn)樣口），

ECD( 電子捕獲檢測(cè)器 )；

自動(dòng)進(jìn)樣器：AS 1310

色譜工作站：Chromeleon 7.2

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（99.5%）；衍生化試劑：三氟雙（*基

硅烷基）乙酰胺（BSTFA）+ *基氯硅烷（TMCS）（99:1，

美國(guó)SUPELCO公司）C18固相萃取柱（美國(guó)SUPELCO公司），

填料 300mg；乙酸乙酯，正己烷，甲醇，乙腈均為色譜純，

氯化鈉為分析純。

樣品：購(gòu)自山東豬飼料

實(shí)驗(yàn)方法

1. 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

電子天平準(zhǔn)確稱取 10.0mg 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，色譜純甲醇溶解

定容到 100ml，充分搖勻，配制成 100ug/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)

備液，置于 4℃冰箱中保存。制作工作曲線時(shí)，再取此儲(chǔ)

備液用甲醇配制成其他濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2. 樣品預(yù)處理方法 [3]

：

2.1  提取

稱取飼料 5.00g 左右，置于 50ml 塑料離心管內(nèi)，加入 40ml

乙酸乙酯，蓋好密封蓋于渦旋混合器上混合 2min，超聲

提取 20min。離心機(jī)上 4000r/min 離心分離 4min，取上清液

20.0ml，用氮?dú)獯抵两?，待凈化?/span>

2.2  液液萃取凈化

稱取 4.0g 氯化鈉加水溶解定容到 100ml，配制 4% 的氯化

鈉溶液。取 20ml 甲醇加 4% 的氯化鈉溶液 80ml，配制成氯

化鈉甲醇溶液。用氯化鈉甲醇溶液 2ml 分三次溶解殘?jiān)?/span>

均轉(zhuǎn)移到一個(gè) 15ml 的具塞離心管中，加 4ml 正己烷，渦旋

混合2min。然后4000r/min離心4min，吸取上層正己烷棄去，

重復(fù)上述操作一次。水相加乙酸乙酯 3ml，混合 2min，

4000r/min 離心 4min，吸取上層乙酸乙酯，同樣的步驟重復(fù)

兩次。然后氮?dú)獯蹈桑?ml5%的乙腈-水溶解，待柱凈化。

2.3  固相萃取柱凈化

準(zhǔn)備好 C18 小柱，順序用 5ml 甲醇，5ml 三氯甲烷，5ml 甲

醇和 5ml 水活化 C18 柱。將處理好的樣品轉(zhuǎn)移到柱上，用

5ml 水淋洗，然后用 6ml 乙腈洗脫，收集在離心管中，用

氮?dú)獯蹈桑苌?/span>

2.4  衍生化

向干的殘留物中加入 100ul 衍生化試劑，蓋塞并渦旋混

合 10s。在 65℃的水浴中反應(yīng) 60min，然后用氮?dú)獯党?/span>

余的試劑。加入 0.25ml 正己烷，渦旋混合 10s，供色譜

分析使用。標(biāo)準(zhǔn)溶液，吹干后，采用同樣的衍生化方法

處理。

3. 測(cè)定

3.1  色譜條件

分析結(jié)果與譜圖

1. 氣相色譜對(duì)氯霉素分析結(jié)果

采用 ECD 檢測(cè)器對(duì)氯霉素衍生化樣品進(jìn)行分析，得到的譜

圖如圖 1 所示：

2. 工作曲線、回收率和精密度

配置濃度分別為 200,100,50,20,10,5ug/L 的標(biāo)準(zhǔn)樣品，衍生化

后，用 ECD 模式下檢測(cè)，得到的線性、檢出限結(jié)果如表 2

所示

稱取飼料樣品，分別添加 2 個(gè)水平濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃

度水平平行測(cè)定 5 次。結(jié)果表明，平均回收率為 80-85%，

相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD, n=5）為 1.4-5%。回收率和精密度數(shù)據(jù)

結(jié)果見(jiàn)表 3

3. 實(shí)際樣品

稱取 5.0g 購(gòu)得的豬飼料中，平行檢測(cè)兩次，未檢出氯霉素

殘留。

結(jié)論

Thermo Scientific 的氣相色譜 Trace 1310 分析飼料中的氯霉

素檢測(cè)限可以達(dá)到 2ug/kg, 定量限達(dá)到 5ug/kg, 優(yōu)于 GB/T 

8381.9-2005 中對(duì)于飼料中氯霉素 5ug/kg 的檢測(cè)限要求。在

分析氯霉素質(zhì)量濃度為5-200ug/kg時(shí)，線性良好，重現(xiàn)性.

瑞盛科技  許波