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1加樣

對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋，如果加樣不準就會造成誤差，尤其當稀釋倍數大時，很小的誤差，會導致較大的相對誤差，使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統處理標本，可較好地避免以上誤差

2洗滌

在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步，應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關，ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。

3 溫育

每種試劑都有其*反應模式，其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時間長，會造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴 ，反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發，板上應加蓋。

4酶標儀 判讀

作為記錄測定結果的儀器，酶標儀 的性能穩定與否，決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養，對濾光片要定期校正；其次酶標儀波長設置要正確，使用雙波長，一個檢測波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說明書