科捷《液相色譜法》

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液相色譜法特點及分類：

氣相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結果，而必須由已知標準作對照定性。當無純物質對照時，定性鑒定就很困難，這時需借助質譜、紅外和化學法等配合。另外大多數金屬鹽類和熱穩定性差的物質還不能分析。此缺點可液相色譜法來克服。

液相色譜法就是用液體作為流動相的色譜法。1903 年俄國化學家M.C.茨維特首先將液相色譜法用于分離葉綠素。 原理和分類 液相色譜法的分離機理是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別。根據固定相的不同，液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。應用zui廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質的鍵合相色譜。

根據固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。

按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠滲透色譜。

近年來，在液相柱色譜系統中加上高壓液流系統，使流動相在高壓下快速流動，以提高分離效果，因此出現了（又稱高壓）液相色譜法。 　

　 ①液固吸附色譜。液相色譜中的一種，是基于物質吸附作用的不同而實現分離。其固定相是一些具有吸附活性的物質如硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。 　　

②液液分配色譜法。基于被測物質在固定相和流動相之間的相對溶解度的差異，通過溶質在兩相之間進行分配以實現分離。根據固定相與流動相的極性不同，分為正相色譜和反相色譜。前者是用硅膠或極性鍵合相為固定相，非極性溶劑為流動相；后者是硅膠為基質的烷基鍵合相為固定相，極性溶劑為流動相，適用于非極性化合物的分離。 　

　 ③離子交換色譜法。基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質離子進行可逆交換，依據這些離子對離子交換基具有不同的親和力而實現分離。薄殼型離子交換樹脂柱效高，主要用來分離簡單的混合物；多孔性樹脂進樣容量大，主要用來分離復雜混合物。 　　

④凝膠滲透色譜法[1] 。又稱為尺寸排阻色譜法 。1959年首先用于生物化學領域。以溶劑為流動相，多孔填料（如多孔硅膠、多孔玻璃）或多孔交聯高分子凝膠為分離介質的液相色譜法。當混合物溶液入凝膠色譜柱后，流經多孔凝膠時，體積比多孔凝膠孔隙大的分子不能滲透到凝膠孔隙里去而從凝膠顆粒間隙中流過，較早地被沖洗出柱外，而小分子可滲透到凝膠孔隙里面去，較晚地被沖洗出來，混合物經過凝膠色譜柱后就按其分子大小順序先后由柱中流出達到分離的目的。用凝膠滲透色譜的優點是：分離不需要梯度沖洗裝置 ；同樣大小的柱能接受比通常液相色譜大得多的試樣量；試樣在柱中稀釋少，因而容易檢測；組分的保留時間可提供分子尺寸信息；色譜柱壽命長。它的缺點是：不能分離分子尺寸相同的混合物，色譜柱的分離度低；峰容量小；可能有其他保留機理起作用時引起干擾。凝膠滲透色譜法為測定高聚物分子量和分子量分布提供了一個有效的方法，此外還可用來分離齊聚物、單體和聚合物添加劑等。 　

　 ⑤離子色譜法。采用柱色譜技術的一種液相色譜法，樣品展開方式采用洗脫法。根據不同的分離方式，離子色譜可以分為離子色譜 、離子排斥色譜和流動相離子色譜3類。離子色譜法使用低容量的離子交換樹脂，分離機理主要是離子交換。離子排斥色譜法用高容量的樹脂，分離機理主要是利用離子排斥原理。流動相離子色譜用不含離子交換基團的多孔樹脂，分離機理主要是基于吸附和離子對的形成。 　

液相色譜法特點及應用：

液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography  HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技

液相色譜法有“三高一廣一快”的特點： 　

　①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 　　②：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到*分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 　

　③高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在uL數量級。 　

　④應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。 　　

⑤分析速度快、載液流速快：較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小于1小時。 　

　此外液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬，柱效率降低。液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。

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