應用植物激素(Planthormone)抗體進行免疫定量
植物激素(Planthormone)是植物體內合成的對植物生長發育有顯著作用的幾類微量有機物質,包括生長素(Auxin)、赤霉素(GA)、細胞分裂素(CTK)、脫落酸(ABA)、茉莉酸、激動素和乙烯(ETH)等(點擊此處查看“Agrisera植物激素抗體產品信息”)。它們都是些簡單的小分子有機化合物,但它們的生理效應卻復雜多樣。其介導的植物細胞功能包括了從影響細胞的分裂、伸長、分化到影響植物發芽、生根、開花、結實、性別的決定、休眠和脫落等各個環節。
對植物激素進行免疫定量的方法主要有放射免疫分析(RIA)和酶聯吸附免疫分析(ELISA),由于前者操作上欠安全等原因,目前常采用后一種類型。在ELISA中,抗原抗體反應的檢測依靠酶標記物來實現,常用的酶有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酯酶(AP)。酶可直接標記激素分子,稱為酶標植物激素,也可標記于第二抗體(識別抗激素抗體Fc片段的抗體或金黃色葡萄球菌A蛋白),稱為酶標二抗。這兩類標記物分別用于固相抗體型和固相抗原型ELISA。
固相抗體型ELISA:將抗激素的單克隆抗體(Mab)與已吸附于固相載體上的兔抗鼠Ig抗體(RAMIG)結合,然后加入激素標準品或待測樣品,使其與固相化的Mab結合,再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記激素(酶標激素)。通過測定酶標激素的被結合量,可換算出未知樣品中激素的數量。
固相抗原型ELISA:將“激素-蛋白”復合物(該蛋白應不同于免疫原中的載體蛋白)包被于固相載體,加入待測激素(樣品或標準品)和抗激素多克隆抗體(Pab)反應,進行競爭反應。然后讓HRP標記羊抗兔Ig抗體(HRP-GARIG)與結合在固相上的Pab反應,通過測定與固相結合的酶量,換算出未知樣品中激素的含量。
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