產品簡介:
本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到,可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測,轉化效率可達108,-70℃保存3-5個月轉化效率不發生改變。
基因型: supE44△lacU169(φ80 lacZ△M15)hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點: 一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產物可與pUC載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現β互補,可用于藍白斑篩選。
操作方法:(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1、將感受態細胞置于冰上融化,以下實驗以100ul感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的DNA,注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一,輕輕旋轉離心管以混勻內容物,冰浴放置30分鐘。
3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒,然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘,注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養基,37℃ 180rpm振蕩培養1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板,37℃倒置培養12-16小時。涂布用量可根據具體實驗來調整,如轉化的DNA總量較多,可取100ul左右的轉化產物涂板;反之,如轉化的DNA總量較少,可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少,可通過離心后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新的平板。
保存條件:-70℃保存,運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年,-70℃保存至少6個月。
注意事項: 1、感受態細胞應保存在-70℃,不可反復凍融,否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作,防止其它DNA或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時,轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比,但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算:轉化率=產生菌落的總數/鋪板DNA總量。
5、為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接產物,以重新轉化,將損失降到低。
相關產品:
產品編號 | 產品名稱 |
C1199 | DH5α感受態細胞 |
I1020 | IPTG 溶液 (50mg/ml) |
A1170 | 氨芐青霉素儲存液(100mg/ml) |
K1030 | Kanamycin (100mg/ml)卡那霉素 |
L1015 | LB固體培養基(干粉) |
L1020 | SOC液體培養基(干粉) |
X1010 | X-gal(20mg/ml) |
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