利用新城疫弱毒Clone30株病毒抗原.通過間接ELISA方法對試劑盒的各項反應條件進行系列的摸索試驗后,成功地組裝了檢測試劑盒。 對ELISA各項反應條件進行摸索,并確定了zui適工作條件,研究結果表明,新城疫病毒抗原*包被濃度為1.086ug/ml,zui適包被條件為4℃過夜,被檢血清*稀釋度為1∶100,酶標結合物*工作濃度1∶800。待檢血清和酶標二抗的反應時間均為37℃ 30分鐘,底物的反應時間為37℃ 15分鐘。采用已確立的ELISA反應條件,檢測14份經西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒檢測為陰性的血清,依據陰陽性臨界值=陰性血清OD平均值+3SD,確定陰陽性臨界值為0.34。用Lasota株全病毒進行阻斷試驗結果表明,Lasota株病毒能夠阻斷陽性血清與包被的Clone30株病毒的結合反應。用此方法檢測E.coli的O_1、O_2、O_(78),AI H_9,EDS_(76),IBD的單因子雞血清,均為陰性,無交叉反應,說明建立的ELISA具有很好的特異性。用已建立的ELISA和西班牙海博萊公司的NDV-ELISA試劑盒同時對64份血清樣本進行檢測,檢測結果表明,建立的ELISA方法的特異性和敏感性分別為90%和93.2%。同時,用已建立的ELISA方法與HI方法對80份血清樣本進行檢測,結果表明ELISA的效價對數與HI效價對數呈線性回歸關系,二者的相關系數(r)為0.91。試劑盒的保存期試驗結果表明,試劑盒可以保存到三個月。 本研究建立了一種經濟、快速、準確的檢測方法,為我國進行ND的血清學檢測和流行病學調查提供了良好的技術手段,為該試劑盒的進一步開發和商品化奠定了較好的基礎。
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