抗體由于性質(zhì)和所使用的儲(chǔ)存條件不同,其存儲(chǔ)的“保質(zhì)期”可能從幾周到幾年不等。每個(gè)抗體存儲(chǔ)的*條件是*的,然而我們還是可能總結(jié)抗體存儲(chǔ)的一些建議和一般準(zhǔn)則。抗體的儲(chǔ)存時(shí)間取決于抗體固有的性質(zhì)和儲(chǔ)存條件。抗體(尤其是酶)必須存放在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值范圍,為了維持蛋白質(zhì)的活性,以及防止其聚集,經(jīng)常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質(zhì)里面。表1 總結(jié)了抗體儲(chǔ)存的一般準(zhǔn)則以及其他的注意事項(xiàng)。
水, 4C | 25-50%的甘油或乙二醇,-20C | 凍結(jié)在-20 - 80C或在液氮 | 凍干 | |
典型的保質(zhì)期 | 1個(gè)月 | 1年內(nèi) | 多年 | 多年 |
抗體濃度 | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml | 1-5 mg/ml |
稀釋載體蛋白 | BSA | BSA | BSA | 沒(méi)有 |
消毒或抗菌的要求 | 是 | 常 | 沒(méi)有 | 沒(méi)有 |
抗氧化劑 | 2-ME, DTT | 2-ME, DTT | 沒(méi)有 | 沒(méi)有 |
熒光共軛 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 | 避光保存 |
pH值 | 7.2-7.6 | 7.2-7.6 | ||
金屬螯合劑 | EDTA | EDTA |
不要用沒(méi)有霜凍的冰箱儲(chǔ)存需要零度以下保存的抗體。一般的家用冰箱是沒(méi)有霜凍的,而且它們可以通過(guò)反復(fù)的自動(dòng)解凍來(lái)防止霜凍的形成。
帶有標(biāo)記的抗體應(yīng)該儲(chǔ)存在黑色瓶子里或者用錫箔紙蓋住瓶子。
一般來(lái)說(shuō),抗體存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會(huì)由于微生物的生長(zhǎng)導(dǎo)致抗體退化和/或失活。抗體儲(chǔ)存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會(huì)受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲(chǔ)存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融,可以分裝抗體。我還可以加入抗微生物藥物(如*或硫柳汞)以避免微生物的生長(zhǎng)。
冰晶的形成能夠破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),因此導(dǎo)致抗體失效。甘油或乙二醇等防凍劑可以防止水分子之間氫鍵的形成,加入到溶液中可以降低其的凝點(diǎn)。所以,溶液的凝點(diǎn)取決于抗凍劑的組成和濃度。具體的見(jiàn)表2。
10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | 100 | |
甘油 | -2 | -5 | -10 | -16 | -22 | -34 | -38 | -19 | -2 | 17 |
乙二醇 | -4 | -7 | -15 | -23 | -34 | -48 | -51 | -45 | -29 | -12 |
Note: 乙二醇是有毒性的,使用的時(shí)候一定要注意安全。
當(dāng)儲(chǔ)存溫度低于抗體溶液真實(shí)的凝點(diǎn)的時(shí)候,抗體溶液就會(huì)凝固。但是,這個(gè)時(shí)候并不會(huì)形成冰晶,而是發(fā)生了玻璃化作用,其可以保持抗體結(jié)果完整性。
為了增加抗體的穩(wěn)定性,可以向抗體中加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲(chǔ)存于-20℃。通常為了避免反復(fù)凍融,可以分裝抗體。
因?yàn)槠胀ǜ视椭泻形⑸镂廴荆允褂脽o(wú)菌的甘油顯得尤為重要。
抗體制劑應(yīng)通過(guò)使用0.45微米的過(guò)濾器過(guò)濾和消毒的,并且其必須進(jìn)行無(wú)菌處理,以防止微生物污染。
抗微生物藥物,如終濃度為0.02-0.05%(W/V)的*(NaN3)或終濃度為0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長(zhǎng)。
*對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞和組織是有毒的。*溶液中抗體不應(yīng)該被直接用在活細(xì)胞中,或在體內(nèi)的研究。此外,*的干擾與大多數(shù)共軛反應(yīng)。*可以通過(guò)凝膠過(guò)濾或透析清除。
蛋白酶抑制劑可以防止蛋白質(zhì)水解。由于腹水和血清制試中都含有蛋白酶,所以儲(chǔ)存這類抗體和制劑的時(shí)候加入蛋白酶抑制劑尤為重要。。冷藏和/或加入蛋白酶抑制劑可用于防止這種降解。
抗體濃度過(guò)低(<1毫克/毫升)更容易發(fā)生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此,我們都要盡量的保持抗體(例如,1-5毫克/毫升)在儲(chǔ)存期間的濃度。通常的做法是添加“載體”蛋白質(zhì),如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失。
多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒(méi)有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。即使沒(méi)有甘油,只要你*凍融,抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。另一個(gè)重要的事情是,該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升,因?yàn)橄〉目贵w容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。
單克隆抗體可以保存在50%的甘油存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃保存。多年未見(jiàn)有失活、細(xì)菌滋生以及氧化。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點(diǎn),它需要昂貴的設(shè)備和勞動(dòng)力。
帶標(biāo)記的抗體一般儲(chǔ)存在黑色容器中或者用錫箔紙蓋住。
堿性磷酸酶和其他酶結(jié)合物對(duì)于冷凍特別敏感,一般應(yīng)在4C短期存儲(chǔ)。
標(biāo)記抗體長(zhǎng)期保存是在終濃度為50%的甘油或乙二醇中于-20C保存。雖然某些酶結(jié)合物可在無(wú)保護(hù)劑的情況下于-20C儲(chǔ)存,但必須分裝,以防止反復(fù)凍融。
熒光遇光容易分解,熒光標(biāo)記的試劑(不只是抗體)必須避光保存,其應(yīng)該存放在4C、避免讓其凝固。
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