臺盼藍(lán)染色液使用說明書
貨號:C0040
規(guī)格:50ml、100ml
保存:4℃保存,一年有效。
產(chǎn)品簡介:
臺盼藍(lán)(Trypan Blue)或稱臺盼蘭、錐蟲藍(lán),是細(xì)胞活性染料,常用于檢測細(xì)胞膜的完整性與細(xì)胞的存活率,是組織和細(xì)胞培養(yǎng)中常用的死細(xì)胞鑒定染色方法之一。正常的活細(xì)胞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺盼藍(lán),細(xì)胞不會被染成藍(lán)色;而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞可被臺盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失,即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡。
臺盼藍(lán)可被巨噬細(xì)胞吞噬,故可用于巨噬細(xì)胞的活體染色劑。凋亡小體也有臺盼藍(lán)拒染現(xiàn)象。臺盼藍(lán)染色后,通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù),就可以對細(xì)胞存活率進(jìn)行比較的定量。染色時間只需3-5分鐘,操作簡單。
臺盼藍(lán)染色液使用說明:
1. 收集細(xì)胞:
用胰酶和/或EDTA消化貼壁細(xì)胞,懸浮細(xì)胞可直接收集。收集的細(xì)胞時用1000-2000 rpm離心1分鐘,棄上清,制備單細(xì)胞懸液,并做適當(dāng)稀釋。
2. 臺盼藍(lán)染色:
細(xì)胞懸液與0.4%臺盼藍(lán)溶液以9:1比例混勻(終濃度0.04%),染色3分鐘 ( 染色3分鐘時間已經(jīng)足夠,但染色時間可以更長一些,但不宜超過10分鐘) 。
3. 細(xì)胞計數(shù):
吸取少量經(jīng)過染色的細(xì)胞,用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。死細(xì)胞著藍(lán)色并膨大,無光澤;活細(xì)胞不著色并保持正常形態(tài),有光澤。通常要比較地進(jìn)行定量,每個細(xì)胞樣品至少數(shù)500 個細(xì)胞。
細(xì)胞存活率(%)= 活細(xì)胞總數(shù)/(活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù))×100%
注意事項:
1. 染色時間不能太長,否則活細(xì)胞也會逐漸積累染料而染成顏色,使檢測結(jié)果偏低;
2. 有潛在致癌危險,為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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12100 DMEM(H)
31800 RPMI Medium 1640
24800 通用細(xì)胞凍存液
H1025 Hanks,含鈣鎂,不含酚紅(HBSS)
P1020 1×PBS,PH7.2-7.4,0.01M,液體
T1300 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅
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