亚洲中文久久精品无码WW16,亚洲国产精品久久久久爰色欲,人人妻人人澡人人爽欧美一区九九,亚洲码欧美码一区二区三区

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>其他文章>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

高速離心機分離血清脂蛋白

來源:四川蜀科儀器有限公司   2013年02月21日 10:11  

  血清脂蛋白是由血液中脂質與某些特異的蛋白質組成的一類不均一的復合物。因其所含脂與載脂蛋白的比例不同,其密度范圍在0.96g/ml或更低1.21g/ml之間。紙電泳中顯示四條帶即:乳密顆粒,低密度脂蛋白,低密度脂蛋白,高密度脂蛋白。每種脂蛋白還可以分為更多的亞組分。
  
  一.梯度材料:血清脂蛋白密度較低,常用的梯度材料為Nacl,NaI,Kbr,KI等,常用的緩沖劑為ED。
  
  二.預分離:
  
  1.血細胞與血清分離:
  
  離心參數:全血,角轉頭,3,000rpm×20min
  
  結果:沉淀為血細胞,上部為血清。
  
  2.乳糜粒分離:禁食12小時以上人血漿中乳糜粒含量少,已進食者因其血漿含乳糜粒高,應先離心去除乳糜粒。
  
  離心參數:4×10(g×min),10°C.各種轉頭轉速均可。
  
  梯度液配置:離心管下部3/4容積加血漿,上部1/4容積加0。5MnaCl 0.3MEDTA,ph7.4
  
  結果:乳糜粒上浮,吸出。
  
  3.血清蛋白分離:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白質。
  
  離心參數:(2。5-3)×10(g×hr),各種轉頭均可。如角轉頭70,000rpm×6hrs,10°C
  
  配置:管容量1/3為血清,2/3為1。31g/ml,NaCl NaBr,攪拌后終密度為1。21g/ml
  
  結果:管上部1/6容積為血清脂蛋白,下部5/6為其它蛋白。
  
  三.方法:
  
  1.順序浮選法:
  
  a)超速法:早使用的方法,4000rpm×24hrs×3次,10°CNaCl NaBr梯度按1。006,1。063,1。21順序浮選,每次在管上部取出不同密度之
  
  脂蛋白。操作簡單,分辨率高,得率高,費時,成本高。
  
  b)超高速法:100,000rpm×2.5hrs×2次,10°C,100,000rpm×4hrs×1次,NaCl KBr EDTA梯度按不含密度浮選出VLDL,LDL,HDL
  
  2.單次離心法:
  
  a)單次水平分離
  
  用高轉速為25,000~28,000rpm,6×40ml甩平轉頭以1.006g/mlNaCl液及1。35g/ml(NaCl KBr EDTA)液配置成從1。0061。21的8層不
  
  連續階梯度,下部用血清與KBr配成1。25g/ml樣品液,25,000rpm×4hrs,4oC一次得到VLDL,LDL,HDL不同層區帶。
  
  用高轉速為40,000rpm,6×13ml甩平轉頭,40,000rpm×24hrs,20°C,不連續KBr梯度1.006~1.21g/ml,細長管,分層清晰,回收率
  
  高,離心時間長
  
  b)單次垂直管分離:
  
  NaCl/KBr或NaCl/NaBr不連續梯度單管容量從5ml到40ml,轉速從50,000rpm~80,000rpm,離心(0。5-3)hrs,下層用KBr或(NaBr)將血清調1
  
  。3g/ml上層用1.006g/ml,NaCl液,10°C-20°C,增加,減速一次分出。NaCl/Sucrose不連續梯度下層為48%W/WSucrose,中層血清在4MnaCl
  
  中,上層為0。67MNaCl 0.05%EDTA,離心參數同上,時間較長。
  
  c)區帶轉頭大容量分離:
  
  離心參數:區帶轉頭,高轉速30,000~48,000rpm,容量從650ml~1900ml,每次可分離血清50-150ml,低速加樣及卸載,分離轉速:大轉頭
  
 ?。?5,000-28,000rpm)×24hrs,小轉頭(30,000-38,000rpm)×1hrs,10°C-20°C
  
  梯度液:NaCl NaBr或KBr EDTA不連續或線性梯度,樣品在大密度層,近轉頭核心處用純水做隔離層,分離室外部用高密度NaCl/KBr或
  
  NaCl/NaBr作緩沖層。

 

免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618