研究人員改進從酵母中提取gDNA的方法

背景：

細胞壁是快速裂解酵母細胞的主要障礙。從酵母細胞中制備gDNA的傳統方法包括使用破壁酶和玻璃珠，之后通過去垢劑裂解細胞，并利用酚-氯仿提取gDNA。在分析大量樣品時，這些方法相當耗時，也相對較貴。

在快速分析時，也可以通過反復凍融裂解細胞。盡管這種方法相對較快，但是在氯仿抽提之后需要將樣品轉移至新的管中，這對于大量樣品的同時抽提就不太方便。另外，還有一種更為簡單的SDS處理方法。不過，似乎產量較低，結果重復性不太好。

方法改進：

由于酵母轉化實驗中常常使用醋酸鋰（LiOAc）來弱化細胞壁，故我們決定將它與SDS結合，來開發一種從酵母中提取gDNA的快速、方法。

我們從YPD平板上挑了8個釀酒酵母的單克隆，重懸在100 µL 200 mM LiOAc和1% SDS的溶液中，并在70°C孵育15分鐘。孵育之后，加入300 µL 96%乙醇，渦旋振蕩混合樣品，并以15000x g離心3分鐘，收集DNA。將DNA沉淀溶解在100 µL TE中，通過短暫離心（15000x g，1分鐘）去除細胞碎片，之后取1 µL上清進行PCR。

我們在不同的反應中擴增了兩個不同的gDNA片段，大小分別為489 bp和2383 bp，并在0.9%的瓊脂糖凝膠中分析了PCR產物。我們發現，通過LiOAc-SDS方法制備的所有樣品都能擴增出兩個片段。

結論：

我們開發出一種從酵母中提取gDNA的快速可靠方法，適用于3500 bp以下的DNA片段的擴增。整個過程可在15分鐘內完成，不需要更換離心管，相當方便。液體和固體培養基的細胞都可使用。此方法適用于酵母重組子的快速篩選或酵母的常規基因分型。

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上海浩然生物技術有限公司

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