蛋白酶功能 :
涉及到許多細胞內和細胞外的過程:
1) 食物蛋白在消化道的消化
2) 激活無活性酶原和多肽激素/神經轉移介質的釋放
3) 調節血凝物質和纖維素
4) 內源性和外源性蛋白的細胞內消化
5) 跨膜的蛋白轉移
6) 微生物對生物體攻擊,通過釋放蛋白酶的導致毒性增加
蛋白酶分類 :
根據催化中心結構的不同蛋白酶可分為4類 :
1. 絲氨酸蛋白酶在其活性中心含有絲氨酸和組氨酸,如: 彈性蛋白酶,血纖維蛋白溶酶,凝血酶,枯草桿菌蛋白酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶、凝血因子等。
2. 半胱氨酸蛋白酶(別名 :硫醇或SH 蛋白酶)在其催化中心含有半胱氨酸,如 : Calpain, 組織蛋白酶B、H和L。
3 天(門)冬氨酸蛋白酶 (羧基蛋白酶)在其活化中心含有天(門)冬氨酸, 如 : 組織蛋白酶D, 木瓜蛋白酶。
4. 金屬蛋白酶含有金屬離子, 即 : 鋅2+在其催化中心,如氨基肽酶,羧基蛋白酶A 和 B,嗜熱菌蛋白酶。
在分離蛋白時,組織或細胞裂解液中充滿了來自溶酶體的酶,并且原來無活性的蛋白酶原被充分激活,開始消化其周圍的蛋白質。為避免此因素,蛋白酶抑制劑必須被加入在緩沖液內以阻止蛋白酶對細胞組織的消化作用。來自哺乳類動物、植物、霉菌或細菌的組織,蛋白酶成分是不同的,并根據機體狀態的發展蛋白酶也可以發生變化。哺乳類動物組織分離時比細菌或其它組織分離時更需要應用蛋白酶抑制劑使組織細胞受到*的保護。因此,在各種蛋白分離時,在各種蛋白電泳時蛋白酶抑制劑的適當選用就成了很重要的因素。
羅氏公司的CompleteTM 混合片,使您不用再花時間去尋找合適的抑制劑,只要加一片進緩沖液,您便可抑制多種不同的蛋白酶,有效地保護您的蛋白。這些溶解迅速的片劑方便可靠,免除了繁瑣的稱量、混合及DMSO溶解。
Roche蛋白保護產品——抑制劑混合片,您的全新選擇 ( cOmplete 和 PhosSTOP)
cOmplete
抑制大多數組織或細胞類型提取液中的蛋白質水解活性, 包括動物、植物、酵母菌、細菌、真菌等。
在細胞溶解液緩沖液中加入一片速溶片即可使用,為您省去大量繁瑣的操作。您不必再用分析天平稱量多種微量,也不必再用二甲亞砜溶解。
一片速溶片可以保護10ml的細胞裂解液中的蛋白質,如果裂解液中蛋白質水解酶的含量很高,一片速溶片作用域7ml的細胞裂解液或者10ml裂解液中投放2片速溶片。
如果需要保存可以將速溶片制成儲備液,制備方法:溶解1片速溶片指5ml重組水中保存。儲存液存放于2~8℃可以保存一天;在-15~-20℃可以保存至少4周。
高濃度存儲液可長期存放。在4°C條件下可儲存1個月,-20°C條件下可儲存至少6個月
PhosSTOP
保護天然蛋白的磷酸化狀態。利用無毒的PhosSTOP混合片劑迅速抑制多種磷酸酶的活性,能夠保護天然蛋白的磷酸化狀態(圖1)。
適用于甲醛固定。保持組織切片中蛋白質的磷酸化狀態。PhosSTOP磷酸酶抑制劑與含甲醛(用于甲醛固定)的緩沖液具有良好的相容性。
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