很多想使用Lonza核轉(zhuǎn)設(shè)備的小伙伴常常會(huì)遇到想做電轉(zhuǎn)但是無(wú)從下手的情況。有些小白不知道怎么做，也不知道應(yīng)該準(zhǔn)備些什么。那么針對(duì)這些問(wèn)題，小編上次為大家整理了一些挑選試劑盒和試驗(yàn)條件的攻略，如有需要請(qǐng)戳下方鏈接查看：

Lonza 4D-核轉(zhuǎn)儀器試驗(yàn)操作全流程攻略（1）——如何選擇需要的試劑盒和程序

那么接下來(lái)，給大家再介紹一下4D核轉(zhuǎn)儀器的操作流程。大家可以根據(jù)以下流程去著手實(shí)驗(yàn)啦，有問(wèn)題可以在評(píng)論區(qū)提問(wèn)哦！

電穿孔是一種常用的物理轉(zhuǎn)染方法。電轉(zhuǎn)染是在瞬間強(qiáng)大電場(chǎng)的作用下把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的一個(gè)過(guò)程。其原理為：細(xì)胞和DNA懸浮在電穿孔緩沖液中，對(duì)細(xì)胞施加高壓脈沖，電脈沖在細(xì)胞膜上產(chǎn)生電位差，使膜產(chǎn)生了一定的通透性，以便DNA進(jìn)入。電轉(zhuǎn)染是一種非常普遍且高效的轉(zhuǎn)染方法，可用于幾乎所有的細(xì)胞類(lèi)型的轉(zhuǎn)染。

電轉(zhuǎn)染整體操作簡(jiǎn)單迅速，想要做好電轉(zhuǎn)試驗(yàn)，那么試驗(yàn)前后的準(zhǔn)備工作是，具體流程小編以文字形式整理如下，文章末附流程圖。

*注：本方案為個(gè)人整理，試驗(yàn)具體的方案及細(xì)節(jié)請(qǐng)參考Lonza提供的Protocol。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

我們需要根據(jù)的細(xì)胞信息確定我們的細(xì)胞適合的程序代碼、細(xì)胞數(shù)、試劑盒等相關(guān)信息。

在試驗(yàn)前，需要根據(jù)試驗(yàn)的樣品數(shù)量準(zhǔn)備試劑耗材、其中用來(lái)后續(xù)使用的培養(yǎng)基和培養(yǎng)板需要進(jìn)行37℃進(jìn)行預(yù)熱。

將試劑盒孵育至室溫，并將試劑盒內(nèi)的solution與supplement按照4.5：1的比例混合均勻。

提前準(zhǔn)備好對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（具體培養(yǎng)方案可參考查到的protocol）。

將儀器開(kāi)機(jī)并設(shè)置好程序。

開(kāi)始實(shí)驗(yàn)

將細(xì)胞處理成單細(xì)胞懸液，選取所需細(xì)胞進(jìn)行離心。注意消化時(shí)間與離心力。

離心過(guò)后，小心吸取上層培養(yǎng)基，盡量吸取干凈，并用配置好的電轉(zhuǎn)buffer重懸細(xì)胞。

3、加入電轉(zhuǎn)底物：質(zhì)粒、RNP、RNA等。并混合均勻。（RNP比質(zhì)粒體積小很多，對(duì)于大質(zhì)粒可以考慮RNP體系，文末附解決方案）

4、將混勻的液體加入到電轉(zhuǎn)的耗材中，應(yīng)該注意的是，加完的液體應(yīng)該在容器底部，內(nèi)部和上方?jīng)]有氣泡，且液面兩端高度一致，與容器底物保持平行。

5、整體試驗(yàn)流程盡量快一些，樣品檢查無(wú)誤后，直接上機(jī)。

實(shí)驗(yàn)后處理

將電轉(zhuǎn)后的耗材從儀器中取出。

輕柔加入預(yù)熱的培養(yǎng)基，混勻細(xì)胞。。

將混勻的液體加入到最終的培養(yǎng)板中并補(bǔ)全培養(yǎng)體系。

Lonza 電轉(zhuǎn)流程