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一文教你如何使用基因轉(zhuǎn)染增強劑-聚凝胺(Polybrene)來提高轉(zhuǎn)染效率
Polybrene，也稱為Hexadimethrine Bromide，是一種多聚陽離子聚合物，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。它主要用作基因轉(zhuǎn)染增強劑，尤其是在逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染中。Polybrene的作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥，從而促進病毒顆粒與細胞的吸附作用。
圖1.聚凝胺(Polybrene)結(jié)構(gòu)式
在病毒介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)染中，它能顯著提高慢病毒和腺病毒等對哺乳動物細胞的感染效率。此外，Polybrene在DNA轉(zhuǎn)染實驗中也能增強脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率，為基因功能研究和基因治療提供支持。它還作為一種抗肝素劑，用于中和紅細胞表面的負電荷，制備非特異性凝集的紅細胞。在蛋白測序領(lǐng)域，Polybrene通過增加多肽的降解和提高PVDF膜的親水性，有助于降低測序過程中多肽的機械損傷，從而改善測序結(jié)果。這些多樣化的應(yīng)用使Polybrene成為實驗室中的工具。
Polybrene的使用濃度需根據(jù)細胞類型優(yōu)化，一般建議在2至10μg/mL，常用濃度為5至8μg/mL。使用前，應(yīng)查閱文獻或進行預(yù)實驗以確定濃度。鑒于Polybrene對某些細胞株可能有毒，尤其是分化的神經(jīng)元和樹突狀細胞，使用前應(yīng)進行毒性測試。此外，由于Polybrene可能對人體有害，操作時須穿戴適當?shù)姆雷o服和手套，避免直接接觸和吸入。關(guān)于儲存，Polybrene在-20℃下建議分裝保存，以保持活性長達兩年以上，避免多次凍融。
產(chǎn)品應(yīng)用介紹
Polybrene在慢病毒感染中的應(yīng)用
細胞接種
病毒準備
第二天，從-80℃冰箱取出慢病毒，置于冰浴中融化。根據(jù)文獻或預(yù)實驗結(jié)果，使用新鮮培養(yǎng)基將病毒稀釋至適當?shù)腗OI濃度。切記輕柔混勻，避免使用振蕩器以免破壞病毒粒子。
注：MOI值=病毒滴度（TU/mL）×病毒體積（mL）/細胞個數(shù)
感染過程
將細胞原有的培養(yǎng)基吸去，加入預(yù)先稀釋好的病毒液、培養(yǎng)基和Polybrene輕輕搖勻，并在37℃下培養(yǎng)過夜。制備混合液時，請按以下順序：首先加入預(yù)熱至37°C的培養(yǎng)基，接著加入病毒液混勻，最后加入Polybrene至所需終濃度（通常為2-10μg/ml，具體濃度可能因細胞類型而異，請查閱相關(guān)文獻）。
注：對于某些細胞如Jurkat、kasumi、NB4、H929、GBC-SD、MCF-7等，以及大部分原代細胞，通常不建議添加Polybrene。
換液培養(yǎng)
感染48小時后，將含病毒的培養(yǎng)基吸除，并替換為新鮮培養(yǎng)基。若感染后24h觀察細胞生長受到抑制，也可在24h更換新的培養(yǎng)基。
檢測分析
繼續(xù)培養(yǎng)細胞24至48小時，然后根據(jù)實驗需求收集細胞，以檢測目的蛋白的表達情況。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株篩選（可選）
確定目的蛋白成功表達后，可根據(jù)載體抗性（puro、neo、Hygromycin B），加入對應(yīng)的篩選藥物；初次構(gòu)建，需要先對目的細胞進行最佳篩選藥物濃度測試，確定篩選藥物添加量；可根據(jù)實驗需求，進行pool或minipool篩選。
翌圣生物的聚凝胺（Polybrene）以其品質(zhì)，已經(jīng)成為科研領(lǐng)域中的工具。自推出以來，它已經(jīng)助力科研人員發(fā)表了68篇科研論文，這些論文的總影響因子累計達到545.607。這些成果發(fā)表在包括《Cell Discovery》、《Cell Metabolism》和《Journal of Extracellular Vesicles》等期刊上。這一數(shù)據(jù)不僅證明了聚凝胺在科研中的重要地位，也反映了其在提升實驗效率和成功率方面的顯著作用。
部分參考文獻（使用翌圣Polybrene發(fā)表）
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
Hieff Trans®Polybrene(hexadimethrine bromide) 聚凝胺(10 mg/mL) | 500 μL/5×500 μL | 40804ES76/40804ES86 |
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