胰蛋白酶大致可以分為兩種，一種是重組胰蛋白酶，一種是非重組的胰蛋白酶。

非重組胰蛋白酶（又稱胰酶）是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，能特異性切割帶正電荷賴氨酸和精氨酸羧基端，通過多重結(jié)晶方式純化，并進(jìn)一步采取層析及超濾技術(shù)制備而得，帶有動(dòng)物源性。

由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基質(zhì)中的蛋白質(zhì)，如：鈣粘素、整聯(lián)蛋白等，因此胰酶現(xiàn)常用于解離組織和單層細(xì)胞。雖然胰蛋白酶能使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散，但不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的反應(yīng)是不一樣的，分散細(xì)胞的活性還與胰酶濃度、反應(yīng)溫度和時(shí)間有關(guān)，在pH條件為7-9、溫度為37℃的條件下胰酶分散細(xì)胞的作用能力。將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，將鈣和鎂結(jié)合成六齒結(jié)構(gòu)，能削弱細(xì)胞間粘附，增強(qiáng)胰蛋白酶對(duì)水解靶向肽鍵的獲取。

早期的胰蛋白酶在生物制藥領(lǐng)域的主要應(yīng)用是胰島素的生產(chǎn)，很快也在其他細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域應(yīng)用起來。動(dòng)物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細(xì)胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。

1. 胰島素、滅活疫苗生產(chǎn)；

2. 組織細(xì)胞分離及培養(yǎng)；

3. 臨床外科使用；

4. 食品行業(yè)加工助劑。

重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的酶，具有穩(wěn)定性好、純度高、無動(dòng)物來源的優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)代生物制藥的生產(chǎn)過程中，使用含有動(dòng)物源的原料，可能會(huì)將引起人畜共患病的潛在病毒源帶入產(chǎn)品中，如瘋牛病的BSE、口蹄疫病毒等，為了減少污染源，通過基因工程技術(shù)合成胰蛋白酶，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。

重組胰蛋白酶多用重組大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達(dá)并經(jīng)過多步層析純化獲得，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源，能特異性切割多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基。因其無動(dòng)物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。

市場主流的重組胰蛋白酶是利用DNA重組技術(shù)在大腸桿菌或酵母中表達(dá)的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶一致，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。其由223個(gè)氨基酸構(gòu)成，含有6對(duì)二硫鍵。該酶包含兩種胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF和TLCK等、金屬離子螯合劑如EDTA等的抑制。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)，同胰蛋白酶一樣，不同的細(xì)胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。

1. 疫苗和重組胰島素生產(chǎn)；

2. 細(xì)胞分析的組織樣本制備；

3. 免疫細(xì)胞治療；

4. 生物藥物生產(chǎn)；

5. 蛋白質(zhì)序列、結(jié)構(gòu)及組學(xué)研究。

產(chǎn)品詳細(xì)對(duì)比

細(xì)胞消化中除了用到最常見的胰蛋白酶外，還有其他很多種類的消化酶產(chǎn)品也可能被用到，這里做一個(gè)總結(jié)，供大家參考：

膠原酶（Collagenase）是一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵，膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白、多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。

1. 膠原酶Ⅰ，通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備；

2. 膠原酶II，用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備；

3. 膠原酶III，常用于乳腺細(xì)胞的制備；

4. 膠原酶IV，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。

5. 膠原酶Ⅴ，適用于胰腺小島細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞的分離。

Accutase是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細(xì)胞消化液，是胰酶-EDTA消化液的替換產(chǎn)品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細(xì)胞。Accutase適用于組織解離和細(xì)胞分離，因分離后的細(xì)胞能保持完好的表面抗原，且不含任何動(dòng)物動(dòng)物或者細(xì)菌來源組分，可滿足對(duì)后續(xù)如細(xì)胞表面標(biāo)記、病毒生長分析、流式細(xì)胞分析以及生物反應(yīng)器相關(guān)檢測等多種實(shí)驗(yàn)的要求。

PerfCell Tryzyme™ Express 酶產(chǎn)品純度高，細(xì)胞傷害小，消化作用溫和，且能穩(wěn)定保存在室溫條件，逐漸成為不同細(xì)胞系培養(yǎng)的理想消化酶。這類的產(chǎn)品使用過程無需使用胰蛋白酶抑制劑來滅活，同時(shí)也不含有動(dòng)物源，對(duì)于一些無血清生長的貼壁細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更為友好。

Dispase II分散酶II，是一種非特異性金屬蛋白酶，在細(xì)胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離出單細(xì)胞，并用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)，如原代細(xì)胞的分離，細(xì)胞傳代等，還可用于消除懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細(xì)胞聚集。與其他細(xì)胞生物學(xué)常用蛋白酶（如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等）相比，該酶具有以下優(yōu)勢：

1. 快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶，對(duì)細(xì)胞損傷小，且能維持細(xì)胞膜完整性；

2. 來源于細(xì)菌，無支原體或其他動(dòng)物病毒污染；

3. 穩(wěn)定性強(qiáng)，不受溫度、pH及血清組分的影響；

4. 可用于多種類型組織和細(xì)胞的分離等。

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