高效液相色譜法包括正相色譜和反相色譜兩種，用于分離、定量、鑒定和分析化學(xué)或生物樣品的成分。然而，這兩種方法彼此之間有很大的不同，在大多數(shù)情況下反相HPLC是更好的選擇。

在正相HPLC中，樣品的分離是通過在固定相中使用親水性基團(tuán)（容易溶于水或被水吸收）來完成的，使極性成分最后被分離出來。在這種情況下，固定相是極性的，而流動(dòng)相是非極性的。

在反相HPLC中正好相反。首先需要去除極性成分，并且在固定相中使用親脂性基團(tuán)（可以溶解在脂質(zhì)、脂肪、油和非極性溶劑中）。在這種情況下，固定相是非極性的，流動(dòng)相是極性的。

反相HPLC的優(yōu)勢

反相HPLC可以在流動(dòng)相中使用水或水性溶劑。與正相HPLC相比，具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢：

? 與其他HPLC方法相比，成本更低

? 溶劑毒性較低，對(duì)環(huán)境的危害較小

? 獲得準(zhǔn)確結(jié)果的同時(shí)，需要更小的樣本量

? 減少溶劑蒸發(fā)

? 可以通過調(diào)節(jié)pH值，改善樣品分離的能力

? 固定相可以保留大多數(shù)的有機(jī)分子

? 降低分析物保留時(shí)間偏移情況的出現(xiàn)

? 提高梯度分離的準(zhǔn)確性

除此之外，使用反相HPLC還有另一個(gè)顯著優(yōu)勢。由于使用疏水性的固定相，反相HPLC有分析含有極性(親水)，非極性(疏水)，離子和可電離化合物樣品的能力。

這些化合物在許多方面具有相似性，用其他方法可能難以分離。反相HPLC可以準(zhǔn)確分析這些特征相似的物質(zhì)從而顯著提高了該方法所適用的樣品類型的靈活性。

然而，任何事物都會(huì)有它的缺點(diǎn)，反相HPLC的缺點(diǎn)是：

? 需要不斷提升分離技術(shù)及能力

? 難以分析胺和水不溶性化合物

? 需要提升系統(tǒng)耐壓能力

? pH值大于7.5時(shí)硅膠會(huì)溶解

? 無法回收洗脫的樣品

? 需要使用其他方法來識(shí)別分析物

盡管存在這些缺點(diǎn)，但是因?yàn)榫哂袕V泛的適用性，且易于重現(xiàn)，反相HPLC依然是常用的分離技術(shù)之一。