1+1＞2|IL - 12/18協同賦能，驅動NK細胞大規模培養新進程

一、NK細胞的重要性與應用前景

NK 細胞作為人體重要的免疫細胞，在抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節中發揮著關鍵作用。在抗腫瘤方面，NK 細胞具有直接殺傷腫瘤細胞的能力，是機體抗腫瘤的一道防線。例如，在肝癌治療中，提高 NK 細胞活性有助于預防肝癌復發，改善患者預后。上海市公共衛生臨床中心對10例肝惡性腫瘤患者進行 NK 細胞過繼回輸治療，結果顯示該療法在提高患者短期生活質量、改善臨床癥狀方面具有顯著效果。在抗病毒感染方面，NK 細胞在機體受到病毒感染時，不需要抗原刺激，就可以產生細胞因子、白細胞介素和干擾素等，對抗腫瘤的發生和病毒感染。在免疫調節方面，NK 細胞能夠調解人體免疫功能，防止產生自身免疫性疾病以及其他免疫功能的異常。臨床上可通過檢測NK細胞的功能，了解病人的免疫狀態，從而判斷患者是否患有免疫功能低下、免疫功能亢進以及免疫增殖病等疾病。

NK 細胞在臨床應用中具有廣闊的前景。例如，在晚期實體瘤治療方面，CEL001 注射液作為申請并通過CDE審評批準的非基因修飾同種異體 NK 細胞候選產品，為晚期實體瘤患者帶來了新的治療選擇。該產品在結直腸癌的動物模型中展現出強大的抗腫瘤活性，并能有效克服結直腸癌異質性難題。此外，NK細胞療法還能配合放化療，有效清除手術不能切除的腫瘤細胞，提高放化療的療效，并降低副作用。對于不適合做手術或放化療的晚期癌癥患者來說，讓 NK 細胞恢復到高水準的活性和數量是一個較好的選擇。術后定期采用 NK 細胞治療還可以預防癌癥的復發和轉移，減緩癌性疼痛，改善睡眠，提高患者生命質量，并延長患者的生命周期。

二、IL-12 和 IL-18 對 NK 細胞的作用機制

（一）協同激活 NK 細胞

IL-18 和 IL-12 聯合刺激對 NK 細胞的活化具有強大的協同作用。白細胞介素 (IL)-18 和 IL-12 都是抗原呈遞細胞響應刺激信號而分泌的細胞因子，在增強 NK 細胞活性、IFN-γ產生和調節免疫反應方面都發揮著關鍵作用。已有研究證明，IL-18 是啟動 NK 細胞以響應 IL-12 產生IFN-γ所必需的。與單獨使用IL-18 或 IL-12 的刺激相比，使用 IL-18+IL-12 的刺激可以誘導更大的NK 細胞脫粒和IFN-γ產生。

（二）促進細胞因子產生

IL-18 和 IL-12 能促進NK細胞產生IL-8等細胞因子。IL-8是一種趨化因子，在宿主對感染的反應中發揮重要作用，同時也具有多種促腫瘤功能。相關文獻揭示，IL-18+IL-12 刺激在多種情況下有效誘導原代人 NK 細胞產生IL-8。研究表明，由 NK 細胞響應 IL-18+IL-12 刺激分泌的 TNF-α作為中間體進一步促進 NK 細胞產生 IL-8。IFN-γ和TNF-α在IL-18+IL-12 刺激后在 NK 細胞中的表達均呈現上調趨勢，其中TNF-α在 IL-8之前產生，且被中和后顯著抑制了 IL-8 的產生，表明 TNF-α通過自分泌的方式對 IL-18+IL-12 誘導 NK 細胞產生 IL-8 的協同作用發揮中間作用。同時，NK 細胞產生的 IL-8 以自分泌或旁分泌的方式進一步加強了 IL-18+IL-12 刺激的 NK 細胞的細胞因子反應。此外，已知的 NK 細胞激活劑和存活因子 IL-15 和 IL-2 也已被證明與 IL-18 和 IL-12 具有協同作用，即 IL-2 和 IL-15 均可以增加 IL-18+IL-12 刺激 NK 細胞產生 IL-8 的協同作用。

三、IL-12 IL-18 聯合培養 NK 細胞的方法

（一）細胞因子誘導增殖

細胞因子在體外擴增 NK 細胞的過程中起著至關重要的作用。研究表明，IL-12、IL-15和IL-18聯合作用能夠誘導出細胞因子誘導的記憶樣NK細胞（CIML NK細胞）。這種CIML NK細胞具有諸多顯著特點，如壽命長，能夠在體內持續發揮作用；細胞毒性高，對腫瘤細胞具有強大的殺傷能力；同時還能分泌大量的 IFN-γ，增強抗腫瘤反應。

據資料顯示，CIML NK 細胞關鍵表型特征包括CD25（IL-2Ra）表達增加，KIRs表達減少，以及TGFβ受體表達減少，這有助于釋放CIML-NK細胞的抑制作用。此外，SEMA7A 表達上調，增加IFNγ的產生可能有助于增強抗腫瘤反應，CpG去甲基化等表觀遺傳變化也已被報道。同時，CIML NK細胞氧化磷酸化（OXPHOS）升高和糖酵解值升高，鐵蛋白受體（CD71）、氨基酸轉運體（CD98）和葡萄糖轉運體（GLUT1 和 GLUT3）在內的營養轉運體的表達增加，這些特性在其長期持久性和回憶功能中起著重要作用。

（二）輔助細胞協助擴增

輔助細胞和滋養層細胞在NK細胞擴增中發揮著重要作用。NK細胞與自體非 NK細胞或生長失活的滋養細胞共培養，可以顯著影響NK細胞的活化和擴增。例如，有研究構建了表達多種效應分子的滋養細胞，如同時表達CD137L、CD48、mIL-15和mIL-21的滋養層細胞，能夠極大地提高NK細胞的擴增數目和純度，并且擴增得到的NK細胞具有較強的細胞毒作用。

此外，還有通過構建慢病毒質粒制備滋養細胞的方法。如構建用T2A連接的 CD86和CD137L的序列和帶有嘌呤霉素抗性的慢病毒質粒，將其包裝后感染k562 細胞，篩選出具有抗性的k562-CD86-CD137L細胞，再用顯示綠色熒光的慢病毒質粒感染，分選出具有綠色熒光標志的細胞，即為滋養細胞。這種滋養細胞在NK細胞擴增培養液中共培育外周血單核細胞，每周重復刺激，可獲得足夠量的 NK細胞。這些方法都為 NK 細胞的擴增提供了新的途徑和思路，有望在臨床治療中發揮更大的作用。

NK細胞培養關鍵細胞因子

逐典生物推出多種NK細胞培養關鍵白介素家族類細胞因子，經ELISA驗證具備高生物活性，經SDS-PAGE與SEC-HPLC驗證具有高純度和高結構均一性，產品齊全，質控嚴格，確保強特異性、高靈敏度、高穩定性及良好的重復性，適用于腫瘤免疫、藥物靶點篩選及表征，全面助力生物藥研發及上市進程。

1. IL-2 Pro(CY017F0100)
   

Figure1.IL-2 Pro同野生型IL-2活性比較

1. IL-15 Pro（CY018F0100）
   

Figure2.IL-15 Pro同野生型IL-15活性比較

1. IL-12(CY071F0010)
   IL-12 Standard
   Chaselection
   Brand A
   

Figure3.Recombinant Human IL-21 stimulates proliferation of T cell

1. IL-18(CY044F0010)
   

Figure4.Recombinant Human IL-21 stimulates proliferation of KG-1 cell

1. IL-21(CY025F0010)

Chaselection

Brand R

Figure5.Recombinant Human IL-21 stimulates proliferation of NK-92 cell

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【關于逐典】

上海逐典生物科技有限公司，坐落于中國（上海）自由貿易試驗區，獲得ISO9001質量體系認證，是一家從事重組蛋白研發和銷售的高新科技企業。

逐典生物始終秉持以客戶為中心的理念，針對重組蛋白的結構設計、純化工藝及其穩定劑型相關的多項關鍵技術進行優化。專業定向蛋白變復性技術，可將大腸桿菌大量表達的變性固體蛋白轉變成高活性可溶性蛋白。憑借技術優勢，逐典生物新品研發周期短且可控性強，為重組蛋白的高質高效研發提供保障，為企業生產降本增效。

公司自成立以來成功開發百余種高活性細胞因子及多種高活性蛋白酶，覆蓋細胞培養、病毒純化以及質量分析等生物工藝各個環節。可廣泛應用于科研、醫藥生產及IVD（體外診斷試劑）等領域，滿足各類用戶所需。