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3’-5’方向的dsDNA外切酶,從dsDNA鏈的3’端逐個去除單核苷酸

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年11月22日 13:16  

 


重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)是一種新型核酸恒溫擴增技術,可以在37~42 ℃條件下,10~30 min內實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點,特別適用于基層和現場即時檢測,可廣泛應用于體外診斷、動物疫病、食品安全、生物安全、農業等領域。
圖1.RPA等溫擴增技術原理圖[1]

 

目前常用的與RPA擴增相結合的檢測方法有電泳法、熒光探針法、側流層析試紙條(LF-RPA)、絮凝分析檢測法,其中熒光探針法因操作簡便、靈敏度高、特異性強、無需開蓋處理產物(減少氣溶膠污染)等優勢,已發展為目前常用的一種結合RPA擴增的檢測手段。熒光探針法RPA主要在RPA擴增的基礎上,加入了Exonuclease III和exo熒光探針,在RPA擴增過程中Exonuclease III會特異地切割熒光探針(THF位點),導致熒光基團與淬滅基團分開,熒光信號被檢測到,通過熒光收集的儀器來實時監控熒光值的變化。翌圣特推出一款Exonuclease III(Cat#14525ES),為RPA擴增技術的廣泛應用助力。
圖2.EXO探針法檢測原理圖[2]

 

翌圣Exonuclease III

翌圣Exonuclease III是一種無堿基序列依賴性的核酸外切酶,該酶作用于雙鏈DNA,從3’OH末端方向逐步切去單核苷酸。該酶能降解平滑末端、3’凹陷末端及有切口的DNA,但是不能降解3’-突出末端大于或等于四堿基的序列。此外,該酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脫嘌呤/嘧啶(AP)位點特異性核酸內切酶活性。

 

產品應用

  • RPA擴增中熒光探針的降解,釋放熒光信號;

  • 分子信號放大技術中雙鏈DNA 3’平末端切割;

  • 單鏈特異性探針的制備;

  • 制備用于雙脫氧測序的單鏈底物;

  • 雙鏈DNA的非定向巢式缺失。

     

性能展示

  • 無核酸內切酶殘留

 



圖3.對翌圣Exonuclease III(Cat#14525ES)進行核酸內切酶殘留檢測,結果顯示測試組與對照組條帶無明顯差異,說明翌圣Exonuclease III(Cat#14525ES)無核酸內切酶殘留。

 

  • 應用于RT-RPA反應,對RNA病毒的檢測限低至10 copies/T

圖4.用翌圣Exonuclease III(Cat#14525ES)進行RT-RPA反應,擴增RNA病毒,檢測限低至10 copies/T。

 

  • 應用于單克隆實驗,提高單克隆陽性率

圖5.使用翌圣Exonuclease III(Cat#14525ES)在單克隆實驗前處理PCR回收產物,用于酶切去除產物中的短片段,提高單克隆陽性率。結果顯示翌圣Exonuclease III(Cat#14525ES)可顯著提高單克隆陽性率,且效果優于進口品牌A*的Exonuclease III產品。

 

 

翌圣RPA相關產品推薦

 

產品名稱

產品貨號

產品作用

Exonuclease III(100 U/μL)

14525ES

具有3’→5’外切酶活性,切斷熒光探針中淬滅基團,釋放熒光

Bsu DNA polymerase(Large fragment,5U/μL)

11078ES

結合引物與原始靶核酸序列互補合成新的DNA模板

T4UvsXRecombinase(2μg/μL)

11079ES

具有配對和鏈轉移活性的重組酶

T4UvsY protein(2μg/μL)

11080ES

重組酶輔助因子,刺激T4UvsX的單鏈DNA依賴性ATP酶活性并降低活性所需的T4UvsX臨界濃度

T4 gene 32 protein(gp 32)T4噬菌體基因32編碼蛋白

11081ES

參與DNA復制、修復、重組與解鏈后的單鏈DNA結合,防止自雜交

Creatine Kinase(2μg/μL)肌酸激酶

14502ES

刺激ATP和肌酸分解為磷酸肌酸

 

參考文獻:
[1] 施奕,徐昌平,余蓓蓓,盧亦愚,梅玲玲.重組酶聚合酶擴增技術研究進展[J].病毒學報, 2020,36(03):522-532.
[2] JiaLi, JoanneMacdonald, Stetten F. Review: a comprehensive summary of a decade development of the recombinase polymerase amplification[J]. The Analyst, 144.



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